אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:06 דק׳ • August 31st, 2026
התחל עם תא גידול רב-שכבתי המכיל תאי יונקים שעברו טרנספקציה ומייצרים וקטורים של וירוס adeno-associated. תא הגידול מסייע ביצירת תפוקה גבוהה של וירוסים באיסוף.
נער את התא בעוצמה כדי לנתק את התאים הדבקים, ובכך לשחרר לתמיכה תאים המכילים וירוסים וחלקיקים ויראליים חוץ-תאיים.
העבירו את התכנים למבחנה וסובבו בצנטריפוגה כדי לשקע את התאים המכילים את הווירוס.
אספו את העילוי המכיל את הווירוס החוץ-תאי והעבירו אותו לבקבוק אחסון.
יש להשעות מחדש את המשקע בבופר ליזיס ולהדגיר.
אנזימים וחומרים דטרגנטיים שבבופר ממיסים את התאים ומשחררים את הווירוסים התוך-תאיים השלמים אל התמיסה.
סנטריפוגו את הליזט כדי לשקיע את השאריות התאיות. אספו את העלייה המכילה את הנגיף והוסיפו אותה לאותו בקבוק אחסון המכיל את הנגיף החוץ-תאי.
יש לשמור את תגלי הנגיף הגולמיים בטמפרטורה נמוכה עד לטיהור נוסף.
לאחר הדגירה, נערו את תא תרבית התאים בעוצמה כדי לשחרר את התאים עד שהתווך נראה עכור, ושפכו אותו לארבעה מבחנות צנטריפוגה בנפח 500-milliliter.
שקיע את התאים באמצעות צנטריפוגציה ב-18,000 x g למשך 30 דקות ב-4 °C. מזיג את העילוי המזוכה לבקבוק PETG בנפח של 1 L, ושקיע מחדש את משקעי התאים ב-50 mL של לysis buffer בתוך מבחנות צנטריפוגה בנפח של 500 mL. דגור את המבחנות למשך 60 דקות ב-37 °C.
לאחר הדגירה, סבב את המבחנות בצנטריפוגה ב-18,000 x g למשך 30 דקות, והע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים