אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:35 דק׳ • August 31st, 2026
התחל עם ליזט תאים מסונן המכיל וקטורים של וירוס אדנו-אסוסיאטיבי (AAV) ומזהמים ממקור התא המארח.
העבירו את הליזאט דרך עמודת זיקה מבוססת הפרין.
חלבוני הקפסיד של הנגיף נקשרים באופן אלקטרוסטטי לקבוצות ההפרין בעלות המטען השלילי.
שטפו את העמודה עם בופר כדי להסיר מזהמים שלא נקשרו.
יש להוסיף באפר המכיל דטרגנט כדי להמיס שיירי ממברנה.
שטוף שוב בעזרת הבופר ללא הדטרגנט.
הוסיפו באפר המועשר בקטיונים כדי ליצור סביבה יונית, ולאחר מכן שטפו עם באפר בעל ריכוז מלח בינוני כדי לשחרר זיהומים הקשורים באופן חלש.
הוסף באפר בעל ריכוז מלח גבוה כדי להפר את האינטראקציות בין הקפסיד להפרין ולהבצע אלוציה של החלקיקים הוויראליים.
אסוף את פראקציוני האלוציה המועשרים בחלקיקים ויראליים שלמים והעבר אותם למבחנות ריכוז צנטריפוגליות המצוידות בממברנות סינון.
סבבו את המבחנות בצנטריפוגה כדי להסיר עודפי בופר, ולאחר מכן אספו את פראקציות הווירוס המרוכזות למבחנה.
שטפו את הממברנה עם הבאפר כדי להפיק חלקיקי וירוס שנותרו ולמקסם את התנובה.
הפשיר את הליזאט הגולמי בטמפרטורה של 4 °C למשך הלילה.
לאחר ההפשרה, סננו אותו באמצעות מסנן 0.22 micron. מיד לפני שלבי הטיהור, בצעו פסיבציה למרכז הצנטריפוגי על ידי הוספת ארבעה מיליליטר של בופר לטיפול מקדים של הסינון עבור כל עמודת heparin-Sepharose שבה נעשה שימוש. הניחו את הצינורית במשאבה פריסטלטית.
העבירו ברצף את התמי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים