טרנסדוקציה של עוברים מופריים של חולדה מבוססת וקטור לנטי-ויראלי

קח צלחת להזרקה מיקרוסקופית עם טיפה של מצע גידול לעוברים במרכזה, המכוסה בשמן מינרלי כדי למנוע התאיידות.

הנח את הצלחת תחת מיקרוסקופ הפוך.

מקם קפילרה למיקרו-הזרקה ופיפטית החזקה על מערך מיקרו-מניפולטור תחת המיקרוסקופ.

הנימיקפילרית של המיקרו-הזרקה נטענת בתרחיף של וקטורים לנטיווירליים הנושאים את הגן המגורה.

לאחר מכן, העבירו את עוברי החולדה המופרות אל התמיה.

ייצבו עובר באמצעות פיפט החזקה על ידי הפעלת שאיבה.

תחת הגדלה גבוהה יותר, הכניסו את קפילרת המיקרו-הזרקה דרך מעטפת הגליקופרוטאין החוץ-תאית של העובר, ה-zona pellucida, והזריקו את תרחיף הלנטי-וירוס אל החלל הפרי-ויטליני (perivitelline space).

לאחר מכן, העבירו את העוברים המוזרקים לכלי תרבית והדגירו אותם.

הנגיף חודר לעובר ומשחרר את הגנום שלו, המכיל את הגן המעובּר (transgene), אל תוך הציטופלזמה.

מאוחר יותר, הוא עובר תעתוק הפוך ל-DNA ונשלב בתוך הגנום של העובר, ובכך משלב את הגן החוץ-גנטי.

העוברים שעברו טרנסדוקציה מוכנים כעת לעיבוד.

עבור מיקרו-הזרקה של וקטור לנטי-ויראלי אל מתחת ל-zona pellucida של עוברים בשלב תא אחד, השתמשו במכשיר למתיחת פיפטות (pipette puller) כדי להכין קפילריות מזכוכית בורוסיליקאט למיקרו-הזרקה באמצעות פילמנט. בכל פעם שהפילמנט מוחלף או שנעשה שימוש בקפילריה מזכוכית חדשה, הריצו בדיקת Ramp כדי לקבוע את הפרמטרים האופטימליים.

בשלב הבא, השתמשו בטיפ של מיקרו-لودר (microloader) כדי לטעון כ-2 µL של תמיסת לנטי-וירוס שהופשרה זה עתה לכל פיפטת מיקרו-הזרקה, תחת מנדף זרימה למינרית לבטיחות ביולוגית. הוסיפו טיפה של 100 µL של מצע M2 למרכז המכסה של צלחת פטרי בקוטר 60 mm. כסו את המצע בשמן מינרלי והרכיבו את פיפטת ההחזקה ואת קפילרת המיקרו-הזרקה הטעונה בוירוס על מיקרו-מניפולטור.

הניחו את צלחת המיקרו-הזרקה תחת מיקרוסקופ הפוך והעבירו 15 עד 20 עוברים בשלב תא אחד אל טיפת ה-M2 שבצלחת המיקרו-הזרקה. לכדו עובר אחד באמצעות פיפטת ההחזקה, והשתמשו בהגדלה של 400 פעמים ובקפילרה מזכוכית כדי להזריק את תמיסת הלנטי-וירוס אל החלל הפרי-ויטליני מתחת ל-zona pellucida, כאשר הקפילרה מוחזקת מתחת ל-zona pellucida למשך רגע לאחר הזרקת הוירוס. כאשר כל העוברים הוזרקו, השתמשו בפיפטה דקה כדי להחזיר את התאים המוזרקים אל צלחת התרבית והחזירו את הצלחת לאינקובטור לתרבית תאים עד להשתלתם.