אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:25 דק׳ • September 30th, 2026
קח פלטה רב-בארים המכילה תאי אפיתל של יונקים.
הכינו דילולים סדרתיים של פסאודו-וירוס המכיל חלבוני ספייק של נגיף הקורונה.
החליפו את המצע בתרחיף נגיפי מדולל בכל באער.
דגרו תוך כדי ניעור מדי פעם כדי לאפשר לחלבוני ה-spike של הנגיף להיקשר לקולטן של תא המאכסן.
הסר את המצע. הוסף מצע המכיל methylcellulose כדי ליצור שכבת כיסוי חצי-מוצקה המגבילה את התפשטות הנגיף, והדגר.
הנגיף חודר לתא ומשחרר את הגנום של ה-RNA שלו.
ה-RNA מכוון את הסינתזה של RNA ושל חלבונים ויראליים חדשים, אשר מתרכבים לחלקיקים ויראליים היוצאים מהתא.
הנגיפים המשוחררים מדביקים תאים סמוכים, ובכך יוצרים אזור שקוף הנקרא פלאק (plaque).
הסר את שכבת הכיסוי ושטוף את התאים.
הוסף צבע והדגר את הפלטה תוך כדי ניעור.
שטפו וייבשו את הבארים.
הצבע צובע את התאים, בעוד שהפלאקים נשארים שקופים.
ספרו את הפלאקים הנראים בכל באר כדי לקבוע את הריכוז הוויראלי.
כדי לקבוע את הטרייטר הוויראלי, זרעו תאי Vero E6 בלוחות של שש בארות בצפיפות זריעה של 6 × 10⁵ תאים לבארה והדגרירו למשך לילה. למחרת, הכינו סדרת מולטיליות של דילול עשרי של מלאי הנגיף על ידי הוספת 900 µL מצע גידול לשבעה מבחנות מיקרו-צנטריפוגה והוספת 100 µL ממלאי הנגיף למבחנה הראשונה. לאחר ערבוב קצר ב-vortex, העבירו 100 µL מהנגיף המדולל לכל מבחנה הבאה, תוך ערבוב ב-vortex בין מבחנה למבחנה. לאחר מכן, החליפו את העל-נוזל ב
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים