נטרול בתיווך נוגדנים של פסאודו-וירוסים המבטאים את חלבון הספייק של נגיף הקורונה באמצעות סרום של מטופלים

קחו פלטה רב-בארים עם סרום של חולה שעבר אינאקטיבציה בחום ומכיל נוגדנים ספציפיים לקורונה בבאר הבדיקה. השתמשו בסרום של אדם בריא כביקורת.

הוסיפו לדגימות הסרום פסאודו-וירוסים המבטאים חלבוני spike של נגיף הקורונה ונושאים RNA המקודד לחלבון פלואורסצנטי ירוק, והדגירו.

בבאר הבדיקה, נוגדנים נקשרים לחלבוני ה-spike ומנטרלים את הפסאודו-וירוסים, בעוד שבבאר הביקורת, נוגדנים לא-ספציפיים אינם נקשרים לחלבוני ה-spike, ובכך משאירים את הפסאודו-וירוסים ללא קישור.

הוסיפו את התערובת לשכבות מונו-שכבה של תאי אפיתל. הדגירו לצורך ספיחה ויראלית.

הוסיפו מצע כיסוי חצי-מוצק לכל באער כדי להגביל את הדיפוזיה הויראלית. דגרו.

בביקורת, פסאודו-וירוסים שאינם קשוריים נקשרים לקולטני התאים, חודרים לתאים, משחררים RNA ומבטאים GFP, ובכך יוצרים מוקדי זיהום פלואורסצנטיים.

בבאר הבדיקה, פסאודו-וירוסים שנוטרלו על ידי נוגדנים אינם מצליחים לחדור לתאים, מה שמונע היווצרות של מוקדי זיהום.

תחת מדמייר פלואורסצנטי, ספרו את מוקדי הזיהום הפלואורסצנטיים.

היעדר מוקדי זיהום בבאר הבדיקה, בהשוואה למוקדים רבים בביקורת, מאשש נטרול של פסאודו-וירוסים באמצעות נוגדנים המצויים בסרום של המטופל.

כדי לזרוע תאים עבור מבחן נטרול, השתמשו בפיפט רב-ערוצי כדי להוסיף 100 µL של תאי Vero E6 לכל באער של פלטת 96 באערים בריכוז של 2×10⁵ תאים למילליטר, והדגירו את הפלטה למשך 24 שע