הפקת לנטיווירוס רקומביננטי בתאים של יונקים

התחילו עם תרבית של תאי יונקים במצע דל סרום.

הוסיפו את קומפלקס ה-DNA-ליפיד לתאים.

הקומפלקס מכיל פלסמידי אריזה לנטיוויראליים ופלסמיד ביטוי המקודד לגן הנחקר.

הדגירה תאפשר את כניסת הקומפלקס לתאים.

החלף את המצע כדי להסיר שאריות של חומר הטרנספקציה והדגר.

בתוך התא, ה-DNAs של הפלסמידים חודרים לגרעין ומכוונים את הסינתזה של RNA ויראלי הנושא את הגן המבוקש ואת הרכיבים הוויראליים, כולל חלבוני הקפסיד והמעטפת, טרנסקריפטאזה הפוכה ואינטגראז.

רכיבים אלו מתחברים לחלקיקי לנטיווירוס רקומביננטיים הנבטים מממברנת המארח.

אסוף את המצע המכיל את החלקיקים הוויראליים ששוחררו.

סבב בצנטריפוגה להשקעת שאריות תאים וסנן את העליון הויראלי להסרת מזהמים שנותרו.

סבב במהירות גבוהה כדי לשקע חלקיקי וירוס שלמים.

יש להסיר את העלייה ולהמיס מחדש את משקע הווירוס בנפח קטן של מצע טרי.

יש לאחסן את הלנטיביריס הרקומביננטי המרוכז בטמפרטורה נמוכה עבור יישומים המשכיים.

כדי להתחיל בייצור הלנטי-וירוס המרוכז, זרעו 1.5 × 10⁶ תאי HEK-293T בצלחת של 60 מ"מ, וגדלו את התאים במצע רגיל בטמפרטורה של 37 °C באינקובטור לח עם 5% CO2. לאחר 24 שעות של דגירה, כאשר תאי ה-HEK-293T הגיעו ל-80% עד 90% התמסגרוּת (confluency), החליפו את המצע ב-3.5 mL של DMEM, ולאחר מכן דגרו את התאים בטמפרטורה של 37 °C באינקובטור לח עם 5% CO2 למשך שעתיים. לאחר הוצאת התאים מהאינקובטור, החליפ