ייצור של חלקיקים דמויי נגיף בעלי יכולת שעתוק ושכפול של נגיף האבולה המכילים רפורטר

התחל עם פלסמיד מיני-גנום המדמה את הגנום של נגיף האבולה ומקודד לחלבונים מבניים ויראליים, גליקופרוטאינים ודגישן לוסיפרז (luciferase reporter).

הוסיפו פלסמידי עזר המקודדים את ה-T7 polymerase, את הנוקלאוโปรטאין הוויראלי ואת רכיבי הפולימראז הוויראליים החיוניים לשכפול ולשעתוק.

הוסיפו סוכן טרנספקציה מבוסס ליפידים לפלסמידים, ערבבו במערבל (vortex), והדגירו את התערובת ליצירת קומפלקסים של פלסמיד-ליפיד.

הוסיפו תערובת זו לתאי כליה אנושיים, ערבבו בעדינות והדגירו.

הקומפלקס הליפי מתמזג עם התא. הפלסמידים חודרים לתא.

הפלסמידים העוזרים מקודדים לחלבונים המתאימים להם.

מאוחר יותר, פולימראז T7 מתמלל את המיני-גנום ל-RNA גנומי ויראלי, שעוטף באופן מיידי בחלבוני גרעין (nucleoproteins).

קומפלקס הפולימראז הוויראלי נקשר ל-RNA הגנומי הוויראלי ומתעתק אותו ל-mRNAs ויראליים. mRNAs אלו מייצרים חלבונים מבניים וגלקופרוטאינים ויראליים.

החלבונים הויראליים מתרכבים כדי ליצור חלקיקים דמויי נגיף שאינם פתוגניים ובעלי יכולת שעתוק ושכפול, או trVLPs, המכילים את הגן הדווח של הלוציפראז.

יש להחליף למצע טרי כדי לשמר את חיוניות התאים ולתמוך בייצור trVLP.

בצע טרנספקציה לתאים באמצעות הפלסמידים הדרושים לייצור TRVLPs. בתוך קבנ Guided BSC, העבר את ה-DNA לשפופרת באמצעות טיפים עם פילטר. כביקורת שלילית באחת הבארות, יש להשמיט את הפלסמיד המקודד עבור הפ