הפקה של נגיף חצבת רקומביננטי המקודד לחלבון מעורר מערכת חיסונית

התחילו עם תרחיף ליפוזומים המכמיס פלסמיד של אנטיגנום של נגיף החצבת רקומביננטי ופלסמידי עזר המקודדים לחלבונים ויראליים חיוניים.

הפלסמיד של האנטיגנום מכיל cDNA של הגנום של נגיף החסבת, אשר שונה כדי לבטא חלבונים מעוררי מערכת החיסון ודיווח פלואורסצנטי בתאים נגועים.

קח תרבית של תאי יצרן נגיף המכילה אנטיביוטיקה למניעת זיהום.

הוסיפו את תרחיף הליפוזומים לתרבית והדרימו.

הליפוזומים מתמזגים עם קרומי התאים כדי להחדיר את הפלסמידים.

מנגנוני תאי המאחסן מתמללים את ה-cDNA של האנטיגנום ל-RNA ואת פלסמידי העזר ל-mRNAs, מה שמאפשר ביטוי של חלבונים ויצירה של קומפלקס השכפול הוויראלי. קומפלקס זה מייצר RNA גנומי, המאפשר ביטוי של חלבונים ויראליים.

RNA גנומי מתחבר עם חלבונים ויראליים ליצירת חלקיקים ויראליים רקומביננטיים.

תאים נגועים מבטאים גם את חלבון הדותק הפלואורסצנטי לצורך הדמיה מיקרוסקופית ומייצרים את החלבון המעורר את מערכת החיסון המקודד על ידי הווירוס.

תאים נגועים יוצרים סינציטיה רב-גרעינית, המהווה סימן היכר של האפקט הציטופתי של חצבת.

השתמשו במיקרוסקופיה פלואורסצנטית כדי לזהות סינציטיה פלואורסצנטית גדולה, מה שמאשר הצלחה בהשגתו של הוירוס הרקומיננטי.

כדי להפיק נגיף חצבת מ-cDNA, 24 שעות לפני הטרנספקציה, זרע תאי יצרן של נגיף החצבת באופן אחיד בצלחת 6 בארות.

זריעה של 200,000 תאים ב-2 milliliters DMEM המכיל 10 percent FBS ל