ייצור וקציר של תאי אפיתל טיפוליים המייצרים נגיפים

התחל עם תרביות של תאי אפיתל של הכליה המגודלים במדיום המכיל סרום.

החלף מ">';medium הזה במדיום נטול סרום המכיל את הווירוסים שעברו הנדסה גנטית ונושאים גנים של אימונומודולטורים לשימוש טיפולי.

דגרו את התאים כדי לאפשר לנגיס להיקשר לקולטני פני השטח של התא.

הסר את העלייה המכילה את שאריות הווירוס שלא נספחו.

הוסף מצע טרי המכיל סרום לשמירה על חיות התאים, והדגר.

במהלך הדגירה, הווירוס חודר באמצעות אנדוציטוזה המתווכת על ידי רצפטורים, משחרר את הגנום שלו, וגנום זה מייצר את ה-RNAs הווירוסליים.

הגנום הויראלי משתכפל, בעוד שה-RNA הויראלי מייצר חלבונים ויראליים חדשים.

החלבונים הוויראליים מתרכבים לחלקיקים ויראליים חדשים ומשתחררים אל המדיום שסביבם.

נגיפי צאצאים אלו חודרים לתאים סמוכים, גורמים להדבקה ויוצרים מקבצים של תאים נגועים.

גרדו בעדינות את השכבה החד-שכבתיות של התאים כדי לאסוף תאים המייצרים צאצאים ויראליים טיפוליים.

אסוף את התרחיף למבחנה ושמור בטמפרטורה נמוכה לצורך ניתוח נוסף.

לצורך ניתוח קינטיקת השכפול של נגיף החסבת, יום אחד לפני ההדבקה, זרעו 100,000 תאי Vero ב-1 מיליליטר של DMEM עם 10 אחוז FBS לכל באער בלוחות של 12 באערים, עם לפחות 2 באערים עבור כל נקודת זמן רלוונטית. כדי להדביק את התאים, החליפו את המצע ב-300 מיקרוליטר של מצע נטול סרום המכיל את הכמות המתאימה של הנגיף. דגרו ב-37 מעלות צלזיוס ו-5 אחוז פחמן דו-