אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:37 דק׳ • September 30th, 2026
התחל עם תרחיף על-תרבית של תאי יונקים המכיל נגיף ההפטיטיס C.
בצעו דילול סדרתי של תמיסת הנגיף במצע גידול.
החדירו כל דילול לשכבה חד-שכבתית של תאי הפטומה והדגירה.
הנגיף חודר לתאים, משחרר את הגנום שלו ומבטא חלבונים נגיפיים, כולל את חלבון השכפול הבלתי-מבני.
תהליך זה יוצר חלקיקים נגיפיים חדשים המנבטים החוצה ומדביקים תאים שכנים, ובכך יוצרים מוקדי תאים נגועים (foci).
לאחר הדגירה, הסר את המצע והוסף מקבע. הדגר בטמפרטורה קרה כדי לקבע את התאים ולהביא לחדירות של הממברנה.
שטפו והוסיפו תמיסת חסימה (blocking buffer) כדי למנוע קישור לא ספציפי של נוגדנים.
הוסיפו נוגדנים ראשוניים הנקשרים לחלבון השכפול הבלתי-מבני.
שטוף כדי להסיר נוגדנים שאינם קשורים.
לאחר מכן, הוסף נוגדנים משניים מצומדים לפלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
שטוף שוב כדי להסיר נוגדנים שאינם קשורים. הוסף צבע קושר-DNA לצביעת הגרעינים.
יש להדמה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנציה ולכמת את מוקדי הפלואורסצנציה כדי לקבוע את ריכוז הווירוס בעילי העלייה.
זריעה של תאי Huh-7.5.1 נאיביים בריכוז של כ-3 × 10³ תאים לבאר באמצעות פלטת 96 בארות. למחרת, ביצוע דילול סדרתי של פי 10 של עליון תרבית נטול-תאים שהופק מתאים שעברו טרנספקציה של HCV RNA באמצעות מצע גידול, והדבקה בשלוש חזרות על תאי Huh-7.5.1. קיבוע התאים 72 שעות לאחר ההדבקה באמצעות מתנול למשך 30 דקות ב-20 ºC-. לאחר הו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים