ויזואליזציה של דיכוי שעתוק בתאים נגועים בנגיף

התחילו עם לוחות כיסוי הנושאים תאי יונקים שטופלו מראש באנלוג של uridine, כאשר קבוצה אחת הודבקה בנגיף והשנייה אינה מדובקת.

בתאים נגועים בנגיף, חלבונים ויראליים נקשרים למנגנון התעתוק של המארח ומעכבים את ייצור ה-RNA של המארח, בעוד שבתאים שאינם נגועים, סינתזת ה-RNA נותרת ללא הפרעה.

שטפו עם תמיסת בופר. הוסיפו פאראפורמאלדהיד כדי לקבע את התאים, ולאחר מכן שטפו. הוסיפו דטרגנט כדי להחדיר חומרים לממברנות התאים, ולאחר מכן שטפו.

העבירו את לוחות הכיסוי לתא לחות.

הוסיפו את תמיסת הצביעה של ה-click המכילה azide פלואורסצנטי, זרז וחומר מחזר, ולאחר מכן דגרו בחושך.

חומר החמצון מפעיל את הזרז, המאפשר לאזיד הפלואורסצנטי להיקשר ל-RNA הנבנה המסומן ב-uridine.

שטפו את לבישתי הזכוכית (coverslips) בבופר, טבלו אותן במים והסירו לחות עודפת.

בעזרת מדיום הרכבה למניעת דהייה (antifade mounting medium), הרכיבו את לוחות הכיסוי על סלייד והניחו להם להתייבש באוויר.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנציה הפוך, עוצמת אות מופחתת בתאים נגועים בהשוואה לתאים שאינם נגועים מעידה על דיכוי תעתוק המושרה על ידי הנגיף.

הניחו כיסויות עגולות בקוטר 12 מילימטר בכל באער של פלטת תרבית רקמות בעלת 12 באערים. לאחר מכן, זרעו תאי 293 במיליליטר אחד של מצע DMEM מלא. הדגרירו את התאים באינקובטור לח בטמפרטורה של 37 degrees Celsius ו-5% carbon dioxide למשך לילה. בהתאם לתכנו