ייצור חלקיקי רטרו-וירוס להעברת גנים

התחל עם תרבית של תאי אפיתל של כליה אנושית שגודלו במצע עשיר בחומרים מזינים.

החליפו את המדיום במדיום עם ריכוז סרום מופחת כדי למזער הפרעות מהסרום ולשפר את יעילות הטרנספקציה.

הוסף את תערובת הטרנספקציה לתאים באופן מדורג (טיפה אחר טיפה).

התערובת מכילה מבנה DNA רטרו-ויראלי הנושא את הגן המבוקש, פלסמיד אריזה המספק חלבונים ויראליים חיוניים, ופוליאתילנימין, היוצר קומפלקסים עם ה-DNA הפלסמידי כדי להקל על התעתוק (טרנספקציה).

דגרו את התאים כדי לאפשר את ספיגת קומפלקס ה-DNA.

החליפו את המצע כדי להסיר שאריות של ריאגנטים לטרנספקציה.

בתוך התא, ה-DNA הפלסמי חודר לגרעין, שם הוא מכוון את ייצור החלבונים הוויראליים וה-RNA הוויראלי הנושא את הגן המבוקש.

רכיבים אלה מתחברים ונניבים אל תוך המצע כחלקיקים רטרו-ויראליים רקומביננטיים.

אסוף את המדיום המכיל את הווירוס ואחסן אותו לזמן קצר בטמפרטורה נמוכה כדי לשמור על יציבות הווירוס.

בצעו סרכוז כדי לשקיע את השאריות התאיות.

חלק את העל-מתוח (supernatant) הויראלי לאליקוויוטים, הקפא במהירות בחנקן נוזלי, ואחסן בטמפרטורה נמוכה לניסויי העברה גנטית מאוחרים יותר.

בצלחית פטרי בקוטר 16 סנטימטר, זרעו תרחיף של תאי Bosc23 בודדים ב-18 מיליליטר של מצע DMEM המועשר ב-10% סרום בקר עוברי. גדלו במשך כ-24 שעות עד שהצפיפות (confluency) מגיעה ל-80%. לאחר מכן, ערבבו קונסטרוקט רטרו-ויראלי MSCV, וקטור אריזה