אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 4:32 דק׳ • September 30th, 2026
בצעו דילולים סדרתיים של תרחיף נגיף הסינציטיום הנשימתי (RSV).
יש להוסיף כל דילול לבארים נפרדות בלוח רב-בארים שזורעו תאי יונקים הרגישים ל-RSV.
דגרו כדי לאפשר לווירוס להיקשר לקולטני שטח הפנים של התא, לגשר על היתוך ממברנות ולשחרר את הגנום שלו אל תוך הציטופלזמה.
בשלב הבא, מרח מצע כיסוי חצי-מוצק כדי להגביל את הדיפוזיה של הווירוס, והדגר.
התאים המודבקים מבטאים את חלבון הפוזיה הוויראלי המתווך היתוך בין תאים, ובכך יוצרים מבנים רב-גרעיניים הנקראים syncytia.
ככל ששכפול הווירוס מתקדם, סינציטים אלו נבלים ויוצרים אזורים בהירים המכונים פלאקים (plaques).
נער את הפלטה בעדינות כדי להסיר את שכבת הכיסוי ושטוף את התאים כדי להסיר שיירי חומרים.
יש להוסיף צבע לצביעת תאים חיים, כך שהפלאקים יישארו ללא צבע.
הסירו את הצבע, חטאו את הפיתח בתמיסת הלבנה ושטפו במים.
השאירו את הצלחת להתייבש באוויר.
בחרו באלגוריות עם פלאקים ברורים וספרו אותם כדי לקבוע את הטר של הווירוס.
כדי לבצע בדיקת טיטרציה של פלאקים, הכין תחילה מצע מינימלי חיוני (MEM) בריכוז 2X על ידי דילול MEM מסחרי בריכוז 10X במים סטריליים והוספה של L-glutamine, 1,000 יחידות למיליליטר penicillin ומיליגרם אחד למיליליטר streptomycin. נער את התמיסה בעוצמה ואחסן אותה בטמפרטורה של ארבעה מעלות צלזיוס, לאחר מכן הוסף 900 µL של MEM ללא FCS לשש מבחנות. הפשר את מנות הווירוס וערבב אות
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים