הפקת תאי גזע עובריים של עכבר שהודבקו בלנטי-וירוס

התחילו עם לנטי-וירוסים הנושאים גן לעמידות לאנטיביוטיקה.

בצעו סבוב בצנטריפוגה להפרדת השאריות. אספו את העלייה (supernatant) המכילה את הנגיפים והעבירו אותה דרך ממברנה נטולת חומרים פעילי שטח (surfactant-free).

פעולה זו מאפשרת ללנטי-וירוסים לעבור תוך כדי שימור של מזהמים.

בצעו אולטרסנטריפוגה לריכוז הנגיפים. הסירו את העלייה והוסיפו תמיסת בופר להשעיה מחדש של הנגיפים.

לאחר מכן העבירו את הת сусפנזיה למבחנה למיקרוצנטריפוגה וערבלו אותה ב-vortex.

סובב בצנטריפוגה כדי להסיר בועות. לאחר מכן, הוסף את הווירוסים למצע הדבקה המכיל תאי גזע עובריים של עכבר וערבב.

סבב במערך צנטריפוגה כדי להגביר את המגע בין הווירוס לתאים, ולאחר מכן דגור.

הנגיפים מעבירים את הגנומים שלהם אל תוך התאים.

הסר את המצע, הוסף מצע טרי והדגר.

הגנום הוויראלי מומר ל-DNA ומשתלב בגנום המארח, מה שמאפשר ייצור של mRNA המנחה את הסינתזה של חלבון העמידות לאנטיביוטיקה.

החליפו את המצע במצע טרי המועשר באנטיביוטיקה לברירה והדגירו באינקובציה.

התאים המבטאים את חלבון העמידות לאנטיביוטיקה שורדים, מה שמוביל לתאים יציבים שהודבקו בנגיף.

ספרו את התאים באמצעות המוציטומטר.

העבירו תאי mESCs שהוכנו מראש לפורמט של פלטה בעלת 12 בארות, בריכוז של 100,000 תאים לבארה, יום אחד לפני ההדבקה. עבור תאים שגודלו בפורמט של 10 ס"מ, שאבו את המצע הישן, הוסיפו 5 mL של 1X PBS, שאבו את ה-PBS