אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:41 דק׳ • September 30th, 2026
קח מבחנה המכילה תרבית התחלה של תאי E. coli מהונדסים, הנושאים את הגן של T7 polymerase המוסדר על ידי lac operator יחד עם פלסמיד ביטוי.
הפלסמיד נושא גן המקודד לחלבון מעטפת המופק מבקטריופאג Qβ.
גן זה מווסת על ידי מקדם T7 ואופרטור lac.
העבר את התרבית לבקבוק המכיל מצע גידול.
דגרו עם ניעור כדי לעודד צמיחה בקטריאלית.
הוסף אנלוג סינתטי של allolactose המבטל את פעילותו של ה-lac repressor, ובכך מעורר את ביטויה של T7 polymerase.
ה-T7 polymerase נקשרת לאחר מכן ל-T7 promoter שבפלסמיד ומבצעת שעתוק של הגן של חלבון המעטפת, אשר מתורגם להפקת חלבון המעטפת.
חלבוני מעטפת אלו מרכיבים עצמיתם לחלקיקים דמויי נגיף (VLPs) היוצרים פיגומים שאינם מדבקים.
העבר את התרבית לבקבוקי צנטריפוגה.
בצע צנטריפוגה כדי לשקיע את התאים.
שפכו את supernatant והעבירו את pellet לשפופרת.
משקע התאים, המכיל VLPs תוך-תאיים, מוכן לטיהור.
לפני תחילת ההליך לביטוי של הבקטריופאג Q-Beta, נגבו את אזור משטח העבודה בתמיסת bleach:ethanol ביחס של 1:1. בסביבה אספטית, הכינו שתי תרביות התנעה של 3 mL על ידי הוספת מושבות בודדות של E.coli BL21 למצע SOB. גדלו את התרביות בחדר בטמפרטורה של 37 °C ובלחות יחסיות של 0% תוך ניעור במהירות של 250 rpm למשך הלילה. למחרת, הוציאו את שתי תרביות ההתנעה של 3 mL מהניעור ובסביבה אספטית שפכו כל תרבית התנעה לתוך בקבוק ארלנמאייר עם מחיצ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים