אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:06 דק׳ • September 30th, 2026
התחל עם שכבת תאים (monolayer) נצמדת המאפשרת הדבקה נגיפית.
שטפו את התאים, ולאחר מכן הוסיפו חומר מפריד כדי לנתק אותם.
סבב בצנטריפוגה והסר את העלייה.
שחזר את התאים בתמיסת סלין מנוטרלת (buffered saline), ולאחר מכן העבר את התאים לקווקטה.
החדר RNA שתומלל משיבוב cDNA מלא של נגיף דלקת המוח היפנית (JEV) הנישא בכרומוזום מלאכותי חיידקי.
יש להפעיל פולסים חשמליים כדי להגדיל זמנית את חדירות ממברנת התא, ובכך לאפשר כניסת RNA.
אפשרו לתאים להתאושש, ולאחר מכן העבירו אותם לתווך תרבית.
ה-RNA שהוחדר מחקה RNA ויראלי טבעי כדי לייצר ויריונים חדשים.
בצעו דילול סדרתי של התאים והעבירו אותם לפלטות עם שכבות תאים טריות.
דגרו את התאים כדי לאפשר לוויריונים להדביק את התאים השכנים.
הסב עם מצע אגרוז והדגר'. המצע יוצר שכבה חצי-מוצקה, המגבילה את התפשטות הנגיף לתאים סמוכים.
התאים הזוהרים עוברים ליזיס ויוצרים פלאקים נפרדים, מה שמאשר הצלחה בשחזור של JEV זיהומי.
התחל עם תאי BHK-21 שגודלו במשך 24 שעות בצלחות של 150 מילימטר בצפיפות של 3 מיליון תאים לצלחת. שטוף את השכבה החד-שכבתית של התאים עם תמיסה A קרה ולאחר מכן נתק אותם על ידי טריפסינזציה. אסוף את התאים על ידי סבוב בצנטריפוגה ב-270 g למשך שתי דקות.
לאחר מכן, השביו את התאים ב-50 milliliters של תמיסה A קרה וסובבו אותם שוב במרכזפוגה. חזרו על שטיפה זו שלוש פעמים. לאחר השטיפה האחרונה, השביו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים