אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 4:05 דק׳ • September 30th, 2026
בתוך קבינה של Containment ביולוגי, שאבו תרחיף נגיפי בעל מידבקות גבוהה אל תוך קפסולה המכילה רשתות TEM.
דגרו במצב אופקי כדי לסייע לנגיפים להיצמד באופן אחיד על פני הרשת.
הסר את התסמין עם הנגיפים שאינם קשורים, ולאחר מכן הוסף מקבע ליצירת קשרי צלב בין חלבונים, דבר המשמר את מבנה הנגיף ומפחית את הזיהומיות.
לאחר הדגירה, שטפו כדי להסיר שאריות של מקבע.
הוסיפו צבע שלילי בעל צפיפות אלקטרונית גבוהה, הנקשר לרשתות המקיפות את הנגיף ומגביר את הניגודיות במהלך הדמיה.
הסר את הפיפט וספוג את הגרידים כדי להסיר עודפי צבע.
הניחו את הקפסולה בתוך מבחנת צנטריפוגה המכילה נייר סינון ספוג בטטראוקסיד אוסמיום, לאחר מכן אטמו את המבחנה והדגירו לצורך קיבוע באדי החומר.
Osmium tetroxide מייצב את מבנה ממברנת הליפידים, משפר את ניגודיות הדימוי ומבצע אינאקטיבציה מלאה של הווירוס, מה שמאפשר העברה בטוחה אל מחוץ לאזור הביו-הכלה (biocontainment).
בתוך מתקן TEM, שטפו את הרשתות, הניחו להן להתייבש באוויר ואחסנו אותן לצורך הדמיה.
שיטה זו מבטיחה טיפול בטוח יותר בדגימות נגיפיות ומקלה על הכנת הדגימות.
لتחילת, חברו את הקפסולה לפיפטה. שאבו 40 µL של תרחיף נגיף לתוך הקפסולה. הניחו את הפיפטה על צדה, כאשר הרשתות מונחות באופן אופקי למשך 10 דקות. לאחר מכן, הרימו את הפיפטה ורוקנו את תמיסת הנגיף לתוך מיכל פסולת. שאבו 40 µL של מקבע glutaraldehyde בריכוז 2%
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים