אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:36 דק׳ • September 30th, 2026
התחל עם קומפלקס של נוקלאו-חלבון ופוספו-חלבון, נקי מ-RNA ומובטא באופן רקומביננטי, הספציפי לנגיף.
דגרו את הקומפלקס עם אוליגונוקלאוטידים של RNA ספציפיים לנגיף כדי להתחיל את ההרכבה של חלקיקים דמויי נוקלאוקפסייד.
במהלך ההרכבה, ה-RNA הנגיפי דוחף את מקטע הפוספו-פרוטאין, ובכך מאפשר לנוקלאו-פרוטאין לעטוף את ה-RNA, מה שיוצר חלקיקים דמויי נוקלאוקפסיד.
סבב את הדגימה בצנטריפוגה כדי להסיר משקעים.
קחו עמודת כרומטוגרפיה של הפרדה לפי גודל (size-exclusion chromatography) שעברה שיווי משקל מוקדם ונארזה בשרף נקבובי, וטענו עליה את עלה הנוזל (supernatant).
בעוד הדגימה זורמת דרך העמודה, קומפלקסי נוקלאוקפסיד גדולים נדחקים מהנקבים ונשטפים ראשונים.
קומפלקסים חלבוניים בגודל בינוני ומולקולות RNA קטנות חודרות לנקבים ונשטפות בשלב מאוחר יותר.
נטר את הבליעה של התסנין כדי ליצור פרופיל אלוציה עם שיאים מובחנים.
השיא הראשון מראה נוקלאוקפסيدات שהורכבו, ולאחריו קומפלקסים חלבוניים קטנים יותר ו-RNA חופשי.
אסוף את הפракציה המתאימה לשיא של הנוקלאוקספיד לצורך תיקוף וניתוח נוסף.
להרכבת נוקלאוקפסאידים ספציפיים לנגיף, ערבבו ודגרו את קומפלקס ה-N0P המנוקה עם RNA oligo ביחס מולקולרי של 1:1.5 בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת. בצעו שיווי משקל מוקדם לעמודת ג'ל פילטרציה לניקוי בקנה מידה קטן באמצעות buffer E, והסירו כל משקע באמצעות סנטריפוגציה.
טען את
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים