אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:24 דק׳ • September 30th, 2026
התחילו עם רשת למיקרוסקופ אלקטרוני חודר (TEM) מצופה פחמן, המונחת על תבנית זכוכית.
הניחו את השקופית בתוך תא והפעילו פריקת מטענים (glow discharge) כדי להפוך את פני השטח של הפחמן להידרופיליים, לצורך פיזור אחיד של הדגימה.
הסר את הפסלית, החזק את הרשת בעזרת פינצטה ומרח עליה תרחיף של ננו-חלקיקים של נגיף הדלקת הכבד E (HEV).
ננו-חלקיקים אלו מורכבים מחלבוני קפסיד רקומיננטיים של HEV ואינם מכילים חומצות גרעיניות או חלבונים ויראליים נלווים.
הדגירה מאפשרת לננו-חלקיקים להיספח לפני השטח של הרשת. לאחר מכן, ספגו את עודפי התמיה באמצעות נייר סינון.
שטפו את הרשת במים דה-יוניים כדי להסיר ננו-חלקיקים שלא נסמכו, וספגו שוב בנייר סינון.
הוסף צבע uranyl acetate והדגר למשך זמן קצר.
Uranyl acetate יוצר רקע צפוף לאלקטרונים סביב הננו-חלקיקים, דבר המשפר את הניגודיות במהלך הדמיית TEM.
ספגו את עודפי הצבע והניחו את הרשת בתא לייבוש עם הסרת לחות.
תחת TEM, ננו-חלקיקי HEV מופיעים כמבנים איקוסהדרליים, חלולים ואחידים, שחסרים חומצות גרעין ויראליות.
דללו את דגימות ננו-חלקיקי ה-HEV לריכוז שבין 0.5 ל-2 mg/mL באמצעות 10 mM MES, pH 6.2 לצורך דימות ב-TEM. יינונו את הרשתות המצופות בפחמן באמצעות glow discharge בזרם של 40 mA למשך 30 שניות כדי ליצור פני פחמן הידרופיליים. פני הפחמן ההידרופיליים של הרשתות נשמרים למשך 30 דקות בלבד לאחר טיפול ה-gl
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים