ריכוז וטיהור של חלקיקי נגיף

קח תרחיף של חלקיקי וירוס המעורבבים עם שיירי תאי מאכסן.

בצע סנטריפוגה כדי לשקיע את השאריות הגדולות יותר. אסוף את העלייה, המכילה את החלקיקים הוויראליים יחד עם השאריות הקטנות יותר.

סננו את העליון כדי להסיר את שאריות הפסולת הקטנות שנותרו.

הוסיפו למסנן תמיסת מלח המכילה פוליאתילנגליקול (polyethylene glycol), או PEG. הפכו את המבחנה כדי לערב והדגירו.

PEG פועל כחומר לדחיסות מולקולרית (molecular crowding agent) הדוחף את החלקיקים הויראליים קרוב זה לזה, ובכך מקדם את שקיעתם.

במקביל, המלח מגביר אפקט זה על ידי נטרול הדחייה האלקטרוסטטית בין החלקיקים הוויראליים, מה שמאפשר להם להתרכז (aggregating).

סובב את המבחנה בצנטריפוגה כדי להשקיע את תצברי הנגיפים. השלף והסר את העליון העשיר ב-PEG.

חזור על הסבב של הצנטריפוגה, והסר כל שארית של על-משקע.

הוסף באפר והדגר תחת ערבוב כדי להמיס מחדש את המשקע.

חלקו את התרחיף המכיל חלקיקי נגיף למנות (aliquots), ואחסנו אותו בטמפרטורה נמוכה במיוחד כדי לשמור על השלמות המבנית של הנגיף ועל כושר ההדבקה שלו.

סבבו במערך צנטריפוגה את העל-נוזל הוויראלי ב-2000 ×g למשך 10 דקות. לאחר מכן, טהרו את המצע הוויראלי על ידי סינונו דרך מסנן מזרק עם קישוריות חלבון נמוכה של 0.45 µm. לאחר מכן, הוסיפו למצע תמיסת polyethylene glycol 6000 בריכוז 5X. הפכו את המבחנה מספר פעמים כדי לערבב. לאחר מכן, דגרו את התערו