הערכת מערכת כיסוי נוזלית לבדיקות פלאקים נגיפיים

קחו פלטה עם מספר בארות המכילה שכבות Ein-cell של תאי אפיתל והוסיפו תרחיף נגיפי לבארות.

דגרו עם נעירה מדי פעם כדי להפיץ את הווירוסים באופן שווה. הווירוסים נצמדים לתאים וחודרים אליהם.

בבאר אחת, יש להוסיף אגרוז מומס, אשר מתמצק לשכבת כיסוי חצי-מוצקה.

בבאר אחר, הוסף שכבת כיסוי נוזלית צמיגה המבוססת על תאית מיקרו-גבישית והדגר.

בתוך התא, הנגיף משחרר את הגנום שלו ומייצר RNA וחלבונים נגיפיים חדשים.

וירוסים חדשים מורכבים, יוצאים מהתאים וגורמים לליזיס של התאים.

וירוסים ששוחררו מדביקים תאים סמוכים, ובכך יוצרים פלאקים.

שאבו את שכבת הכיסוי הנוזלית והוסיפו מקבע כדי לשמר את התאים שלא עברו ליזה.

שפכו את המקבע והסירו את שכבת האגרוז העליונה.

הוסיפו צבע השומר על תאים חיוניים, כך שהפלאקים יישארו ללא צבע. לאחר מכן, שטפו את שאריות הצבע.

הכיסוי הנוזלי מניב מספר פלאקים דומה לזה של הכיסוי החצי-מוצק, דבר התומך בשימוש בו כחלופה במבחני פלאקים.

ביום שאחרי הזריעה, השתמשו במיקרוסקופ הפוך כדי לבדוק את ההצפיפות (confluency) והחיוניות של התאים לפני תחילת הבדיקה. ודאו כי התאים מראים מורפולוגיה תקינה והצפיפות היא כ-90%.

בצעו מהילול סיֶרִי עשירתיים (tenfold serial dilution) של הדגימות המדבקות במצע גידול תאים, תוך התאמת מספר המהילולים הנדרשים בהתאם לטרטר (titer) הצפוי של הנגיס הנדון. כמו כן, הכינו דגימת ביקורת לא מודבקת כדי להבטיח בא