Name: פליטת אור הדמיה עבור הערכת התגובה החיסונית לאחר השתלת רקמת לב הנדסי (EHT) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: למדו דימות פליטת אור חי לניטור תגובות חיסוניות לאחר השתלת רקמת לב הנדסית בעכברושים. שיטה זו מאפשרת מעקב לא פולשני וארוך טווח אחרי הישרדות השתל ודחייתו.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

סוניה Schrepfer, לנארד קונראדי וארנה הנסן זכו למימון של דויטשה Forschungsgemeinschaft (DFG, SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). העבודה נתמכה גם על ידי מענקים של האיחוד האירופי כדי תומאס Eschenhagen (EUGeneHeart ו Angioscaff).

1. EHT הדור ותרבות תנאי ייצור של EHT מבוסס הפיברין בוצע כפי שתואר במקום אחר 4. בקיצור, לייצר מבוסס הפיברין EHT למטרות השתלה, לערבב מאסטר הוכן המכיל תאים מבודדים ROSA בילוד / בלוציפראז-Lew הלבבות מהונדס עכברוש, שור Matrigel פיברינוגן ו. Agarose תבניות יציקה הוכנו באמצעות מפרידי טפלון להציב 6-היטב מנות התרבות. לאחר התמצקות של agarose, מפרידי הוסרו הודעה מתלים סיליקון הונחו על מאכלים עם התרבות שנכתבו להגיע לתוך תבניות. כדי ליצור EHT, mastermix היה מעורב לזמן קצר עם כמות מחושבת של תרומבין ו pipetted לתוך התבנית. לאחר polymerisation של פיברינוגן, מתלים סיליקון עם EHTs דבקות ההודעות הוסרו בעדינות את תבניות יציקה agarose, הועבר חדש 6-היטב בתרבות מנות התא נשמר 37 ° C, 7% CO 2 תאים תרבות חממה באמצעות מחוייט תרבית תאים בינוניים. EHT הוחזקו בתנאי תרבית תאים עד היום בעשר. במהלך פרק הזמן הזה, בילוד לב תאים עכברוש החל הקישוריות, מאורכים ליישר קווים כוח בין ההודעות סיליקון. בזמן ההשתלה, התכווצויות קוהרנטית ספונטנית נצפו, להסיט ההודעות סיליקון. 2. EHT השרשה EHT ההשתלה בוצעה או immunocompetent בראון נורווגיה (BN) חולדות או עכברים בעירום immunodeficient לחקור את התגובה החיסונית allogeneic. BN ו בעירום חולדות במשקל 100-150 גרם נרכשו מ צ'ארלס ריבר גרמניה (Sandhofer מאייתים 7, D-97633 Sulzfeld) ושוכנו בתנאים רגילים, נמאס תקן עכברוש ושולחת libidum מים המודעה. חולדות Immunodeficient שוכנות מצעים, כלובים סטרילי, מעוקר מים משמש. הוועדה הגרמנית ביקורת אתית נבדקה ואושרה הנהלים בעלי חיים. כל המכשירים כירורגית הם מעוקרים לפני השימוש. הליך ההשתלה מתבצעת כדלקמן: עכברוש הם anesthesized עם isoflurane (2.5-3%) באמצעות תא אינדוקציה. החשיפה האנושית isoflurane יכול להיות מופחת על ידי עבודה בטבלה משב רוח נשא או מכסה המנוע הלא הסירקולציה המחודשת. טמפרטורת הגוף נשמרת במהלך ההליך הכירורגי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גילוח באזור הבטן להחיל משחה העין כדי למנוע את העיניים מהתייבשות במהלך ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את חולדה על הגב שלה במקום facemask על האף והפה שלה כדי לשמור על הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את אזור הבטן באמצעות בבטאדין ואז אתנול 80%. ספוגית מן נקי ומלוכלך, ממרכז האזור מגולח נע החוצה לעבר האזור שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק רפלקסים צובט את הרגליים האחוריות כדי להיות בטוח כי החולדה הוא הרדים מספיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את בעלי החיים לבצע חתך בבטן קו האמצע המפריד בין העור והשרירים בשני שלבים כדי לפתוח את הבטן. חם עיקור חרוז משמש בין העור ופתיחת השריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המעיים כפפה אבקת מלח חימם לחות ללא תשלום. מקפלים את הכפפה סביב המעיים כדי למנוע אובדן לחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרה של רקמת שומן ולחשוף את הטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המחש להפיץ omentum יותר עם מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לחתוך EHT מ השעיית ההודעות סיליקון ולהעביר אל omentum יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עטפו את omentus גדול סביב EHT ולתקן באמצעות שני יחיד 7-0 תפרים prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבא להעביר את המעיים בחזרה לתוך הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוקן את הבטן עם מי מלח סטרילית prewarmed. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת השרירים של דופן הבטן באמצעות תפרים ריצה 6-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) פועל תפרים כדי לסגור את העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד העכברוש עדיין הרדמה, להזריק 5 מ"ג / ק"ג Carprofen תת עורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לספק שיכוך כאבים מספיק עבור סוג זה של ההליך, משכך כאבים (כגון Metamizol) מתווסף מי השתייה (50 מ"ג Metamizol 100 מ"ל) עבור משככי כאבים להשתלה 3 ימים הודעה. </li></ol> 3. פליטת אור הדמיה של השרשה בעקבות EHT הפלטפורמה bioimaging IVIS (Xenogen, Alameda, קליפורניה, ארה"ב) משמש עבור הדמיה בלתי פולשנית פליטת אור ב-vivo ואת התוצאות מנותחות באמצעות תמונה Living IVIS (Xenogen) חבילת תוכנה. ההדמיה מתבצעת מדי יום החל 2 שעות לאחר הניתוח. הרדימי עכברוש עם isoflurane (2.5-3%) באמצעות תא אינדוקציה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את אזור הבטן החזה נרחב באמצעות Provo-יוד, השתמש הבא אתנול 80%, לחזור על פעולה זו שלוש פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק d-Luciferin (Xenogen: 375 מ"ג / ק"ג משקל גוף) ip </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים חולדות מורדמים לתוך הדמיה IVIS קאמרית (עד 4 חולדות ניתן לנתח באותו זמן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העריכו את עוצמת האות של lUC + תאים בתוך EHT ביחידות של פוטונים / sec / cm 2 / steridianin האזור של עניין (ROI) בתחילת המחקר (120 דקות לאחר ההשתלה) ו ב 1 ימים, 2, 3, 5, 7, 10, ובאותו שבועות 2, 3 ו 4. הערה האות השיא (מופיע סביב 20 דקות לאחר ההזרקה d-Luciferin). </li></ol> יצירת גרף (Excel) מראה את עוצמת האות לאורך זמן. 4. קורלציה של תוצאות BLI ו ELISPOT הסלולר ב-vivo התגובות החיסוניות ב BN immunocompetent וחולדות בעירום immunodeficient נחקרו EHT לאחר ההשתלה. הטחול בעלי חיים שנקטפו הנמען היה 5 ימים לאחר השתלת EHT לבודד splenocytes הנמען. מבחני Elispot באמצעות mitomycin-עכבות EHTs (סיגמא אולדריץ', בסנט לואיס, מיזורי, ארה"ב), כמו ממריץ x10 ו 5 6 splenocytes הנמען כמו תאים המגיב בוצעו על פי פרוטוקול של יצרן (BD Biosciences) באמצעות IFN-γ ו-IL-4 מצופה צלחות לחקור-TH1, ותגובה Th2, בהתאמה. IFN-γ ו-IL-4 נקודות היו גבוהים יותר משמעותית במודל, immunocompetent לעומת המודל immunodeficient (IFN-γ: p = 0.001, IL-4: p = 0.023; של סטודנטים מבחן t). 5. נציג תוצאות: <img src="/files/ftp_upload/2605/2605fig1.jpg" alt="איור 1"> באיור 1. קורלציה של תוצאות BLI ו ELISPOT א) הסלולר בתגובות המערכת החיסונית vivo ב immunocompetent בראון נורבגיה חולדות בעירום immunodeficient נחקרו לאחר ההשתלה EHT. Splenocytes מקבל נבצרו 5 ימים לאחר ההשתלה EHT. IFN? ו IL-4 ביטוי הוערך על ידי מבחני ELISpot באמצעות mitomycin-עכבות EHT כמו לגירוי ו 5x106 splenocytes הנמען כמו תאים המגיב. Th1 Th2 והתגובות היו גבוהים יותר משמעותית במודל immunocompetent לעומת המודל immunodeficient כפי שמעידים IL-4 ו IFNγ הייצור בהתאמה. ב) לוק EHTs + הושתלו omentus יותר של חולדות או עכברים או BN immunocompetent בעירום immunodeficient. הישרדות התא אחריו longitudinally ידי BLI. שיעור חיות דחו את EHTs המושתלים מוצג. כל חולדות BN במהירות דחה את ההשתלות EHT, ואילו התאים ששרדו בחולדות T תא לקוי.

<ol><li>Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+myocardial+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Engineering myocardial tissue.</a> Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).</li>
<li>van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transplantation+of+adipose+tissue-+and+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+the+infarcted+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart.</a> Transplantation. 87, 642-652 (2009).</li>
<li>Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Firefly+rats%22+as+an+organ%2Fcellular+source+for+long-term+in+vivo+bioluminescent+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">"Firefly rats" as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging.</a> Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).</li>
<li>Hansen, A., Eder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Drug+Screening+Platform+Based+on+Engineered+Heart+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue.</a> Circ Res. , (2010).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

לפני יישום קליני של הטכנולוגיה EHT לתיקון לב, שאלות בסיסיות כגון immunogenicity של שני המרכיבים הסלולר מטריצה ​​או הישרדות השתל לאחר ההשתלה צריך להעריך במודלים ניסיוניים. In-vivo הדמיה פליטת אור מייצג שיטה חדשה שימושי להישרדות התא ניטור לאחר ההשתלה . אנחנו שנוצר בהצלחה מבוסס הפיברין EHT המכיל בלוציפראז חיובי (לוק +) לתאי לב על ידי עיבוד של פרוטוקול מבוסס 4. EHT אלו מושתלים לתוך omentum גדולה יותר של חולדות הנמען. הזרקת intraperitoneal של המצע ספציפי (d-Luciferi...

<ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללו-Tg (Gt (רוזה) 26Sor לוק) 11Jmsk חולדות (מספר NBPR עכברוש 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיברינוגן שור (פתרון במלאי: 200 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​aprotinin בתוספת 5 מיקרוגרם / פיברינוגן מ&quot;ל NaCl 0.9%, Sigma F4753) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Matrigel (BD Bioscience 356235) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DMEM (Biochrome F0415) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סוס בסרום (Gibco 26050) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פניצילין / סטרפטומיצין (Gibco 15140) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינסולין (סיגמא אולדריץ I9278) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aprotinin (Sigma Aldrich A1153) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> d-Luciferin (ביוסינט L-8220) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Enzyme-linked immunosorbent (ELISpot) במקום assay צלחות (להסה Laborbedarf, S2EM004M99) </li></ul>

פליטת אור הדמיה עבור הערכת התגובה החיסונית לאחר השתלת רקמת לב הנדסי (eht)

Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue (EHT)

טכניקות שונות של הנדסת רקמות לב כבר רדף בעשורים האחרונים, כולל אסטרטגיות פיגומים או באמצעות דובר או bioartificial חומרי הפיגום, המלכוד של myocytes לב ב הידרוג כגון הפיברין או קולגן הערמה של monolayers myocyte 1. מושגים אלה מכוונים שיקום תפקוד הלב נפגע (למשל לאחר אוטם שריר הלב) או כמודל ניסויי (טוקסיקולוגיה חזוי למשל וסינון חומר דוגמנות או מחלה). ניטור מדויק של הישרדות התא לאחר השתלת רקמת לב מהונדסים (EHT) הפכה כעת ניתן להשתמש ב-vivo הדמיה פליטת אור (BLI) טכניקות 2. כאן אנו מתארים את הדור של EHT מבוסס הפיברין מהלחץ עכבר מהונדס עם הביטוי הנפוץ של גחלילית בלוציפראז (רוזה / בלוציפראז-Lew Tg: 3). השרשה מתבצעת לתוך omentum גדול יותר של זני עכברים שונים כדי להעריך את התגובה החיסונית של גוף המקבל הבאים ההשתלה EHT. השוואה של תוצאות שנוצר על ידי BLI לבין אנזימים מקושרים טכניקה חיסונית ספוט (ELISPOT) לאשר את השימושיות של BLI להערכת התגובה החיסונית.

וידאו זה מדגים את השימוש<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה פליטת אור ללמוד התגובה החיסונית לאחר השתלת רקמת לב הנדסי (EHT) בחולדות.

פליטת אור הדמיה עבור הערכת התגובה החיסונית לאחר השתלת רקמת לב הנדסי (EHT)

במהלך העשורים האחרונים נבחנו טכניקות שונות של הנדסת רקמות לב, כולל אסטרטגיות של פיגומים המשתמשות ברקמה טבעית או ב...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא להשתמש בדימוי ביולומינצנציה in vivo כדי לחקור תגובות חיסוניות לאחר השתלה של רקמת לב מהונדסת או EHT בחולדות. דבר זה מושג תחילה על ידי יצירת EHT חיוביים ללוסיפראז. לאחר מכן, EHT המבטאים לוסיפראז באופן יציב מושתלים באומנטום רחב (greater omentum) של חולדות מקבלות.לאחר מכן, ניתן לבצע הדמיית ביולומינצנציה in vivo בבעלי החיים המקבלים כדי לנטר באופן לא פולשני את ההישרדות והדחייה של ה-EHT לאורך זמן. באמצעות מודל זה, ניתן לקשר, למשל, את העוצמה והקינטיקה של דחייה חריפה לירידה בעוצמת אות הביולומינצנציה הנצפית לאורך זמן. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו היסטולוגיה הוא שמדידות יומיות מאפשרות הערכה לא פולשנית ואורכית של הישרדות השתל.שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי ההישרדות והדחייה של רקמות לב מהונדסות, אך ניתן ליישמה גם לשאלות אחרים. לדוגמה, מטבוליזם של ehs. טכניקת ה-bili תודגם על ידי Christiana Parman, המבצעת טכניקה זו על בסיס יומי.במעבדה שלי, תחילה מבודדים תאי לב טרנסגניים מחולדות新生 (neonatal) מסוג Luciferase Lu כדי לייצר DHT מבוסס פיברין למטרות השתלה; מכינים תערובת מאסטר (master mix) המכילה תאים שבודדו מלבבות של חולדות新生 טרנסגניות מסוג luciferase, lu, פיברינוגן בקר ומטריג'ל (matrigel) ב-X-D-M-E-M ו-NKM. מכינים תבניות יציקה של aros על ידי הוספת תשעה מיליליטר של 2% aros ב-PBS לכל באר בצלחות תרבית של שש בארות, ולאחר מכן מניחים ספייסרים (spacers) מטפלון בתוך הבארות. לאחר שה-aros מתמצק, מסירים את הספייסרים ומניחים רשתות עמודים מסיליקון על צלחות התרבית, כך שהעמודים חודרים אל תוך התבניות.כדי לייצר EHT, ערבבו בעדינות את תערובת המאסטר (master mix), לאחר מכן הוסיפו כמות מחושבת של thrombin לתערובת המאסטר וערבבו קצרות. לאחר מכן, העבירו במהירות בעזרת פיפט 1100 µL של תערובת המאסטר לכל תבנית. לאחר פולימריזציית הפיברינוגן, הוציאו בעדינות את המתקנים עם העמודים שעליהם נדבקו כעת ה-EHT מתבניות היציקה של ה-agros והעבירו את המתקנים לצלוחיות תרבית תאים חדשות בעלות שישה בארות המכילות 8 mL של מצע גידול מותאם אישית לכל באר.את ה-EHT מתחזקים למשך 10 ימים באינקובטור לתרבית תאים בטמפרטורה של 37 °C וב-7% carbon dioxide. את המצע מחליפים שלוש פעמים בשבוע. במהלך תקופת תרבית זו, תאי לב של חולדה ניאונטלית יתחילו להתארך, להתחבר ולהסתדר לאורך קווי כוח בין עמודי סיליקון.בזמן ההשתלה, ייראו התכווצויות קוהרנטיות ספונטניות. סטריליזציה של מכשירים לניתוח תבוצע באמצעות אוטוקלבה לפני השימוש; חממו 30 milliliters של תמיסת סליין סטרילית. חולדות להשתלה צריכות לשקול 100 עד 150 grams ולהיות מחוות בתנאים קונבנציונליים, עם אספקה של מזון סטנדרטי לחולדות ומים ad libido.בסרטון זה נעשה שימוש בחולדות נורווגיות חומות לאחר הרדמה; הרדימו את החולדות לפני הניתוח ואשרו את רמת הסדציה על ידי היעדר תגובה לצביטה בבהו, והזריקו 5 mg/kg ממשקל הגוף של קרנס תת-עורית אל תוך השוק. גלחו את אזור הבטן ומרחו משחה לעיניים כדי למנוע את התייבשות עיני בעל החיים. במהלך ההרדמה, חטאו את אזור הבטן באמצעות Betadine, ולאחר מכן באמצעות סמרטוט עם ethanol 80%, בניגוב מהאזור הנקי אל האזור המזוהם. חזרו על פעולת החיטוי זו.בצעו שלוש פעמים, כסו את בעל החיים ובצעו חתך בקו האמצע של הבטן, תוך הפרדה של העור והשריר בשני שלבים כדי לפתוח את חלל הבטן. השתמשו בסטריליזציה באמצעות חרוז חם על הכלים בין חתך לחתך. הרטיבו כפפה עם אבקה בתמיסת סלין.הניחו את המעיים בתוך הכפפה. קפלו את הכפפה סביב המעיים כדי למנוע איבוד לחות. הרחיבו את החתך וחשפו את הטחול.זהו והרחב את ה-greater momentum באמצעות פינצטה. גזור בזהירות את ה-EHT מעמודי הסיליקון התומכים והעבר אותו אל ה-greater momentum. עטוף את ה-greater momentum סביב ה-EHT וקבע אותו באמצעות שתי תפרים בודדות של seven oh proline.בשלב הבא, החזיר את המעיים אל תוך הבטן. שטוף את חלל הבטן ב-1 mL של תמיסת סליין סטרילית שחוממה מראש. סגור את שכבת השריר של דופן הבטן באמצעות תפרי רצים של Prolene 6-0.השתמשו בתפרי תסביב מסוג 5-0 Prolene לסגירת העור כדי לספק אלגזיה מספקת עבור סוג זה של פרוצדורה. הוסיפו 50 milligrams לכל 100 milliliters של שמן למי השתייה למשך שלושה ימים לאחר ההשתלה. פלטפורמת ה-IVUS Bioimaging משמשת להדמיית ביולומינסנציה לא פולשנית in vivo, והתוצאות מנותחות באמצעות תוכנת ה-IVUS living image.דימות החבילה מבוצע מדי יום, החל משעתיים לאחר הניתוח. לפני ויזואליזציה של הביולומינסנציה של ה-EHT, הרדימו את החולדה ואשרו את הסדציה באמצעות לחיצה על בהונות. חטאו את אזור הבטן באמצעות סבון ומגבונים.הזריק Lucifer במינון התחלתי של 375 milligrams per kilogram למשקל גוף והנח את החולדה המורדמת לתוך תא הדמיון של ה-ivu. ניתן לנתח עד ארבע חולדות בו-זמנית. השתמש בתוכנת ה-IVUS living image כדי לצפות ולתעד את שיא האות, המופיע כ-20 דקות לאחר הזרקת ה-Lucifer.לאחר מכן, קבעו את עוצמת אות הבסיס של תאים חיוביים ללוסיפראז בתוך ה-EHT ביחידות של פוטונים לשנייה לסנטימטר רבוע ל-Ceridian באזור העניין, 120 דקות לאחר ההשתלה ובימים 1, 2, 3, 5, 7, 10, ובשבועות השני, השלישי והרביעי. ניתן להציג את הנתונים בצורת גרף, המראה את עוצמת האות לאורך זמן. התגובות החיסוניות התאיות in vivo בעכברי Brown Norway בעלי מערכת חיסון תקינה ובעכברים עם חסר חיסוני.חולדות עירומות נבדקו לאחר השתלת EHT; תאי SP מקבלים נאספו חמישה ימים לאחר השתלת ה-EHT. ביטוי של Interferon gamma ו-IL-4 הוערך באמצעות בדיקות ELISA, תוך שימוש ב-EHT שעוכב על ידי mitomycin כמעוררים וב-5×10⁶ תאי מקבלים כתאי מגיבים. התגובות של Th1 ו-Th2 היו גבוהות באופן מובהק במודל בעל הכשרה חיסונית בהשוואה למודל עם חסר חיסוני, כפי שעולה מייצור של Interferon gamma ו-IL-4 בהתאמה.EHS חיוביים ל-LUCIFERASE הושתלו באומנטום הגדול (greater omentum) של חולדות PN בעלות מערכת חיסון תקינה או של חולדות nude חסרות מערכת חיסון. הישרדות התאים נמעקבה לאורכה של תקופה באמצעות BLI. מוצג שיעור בעלי החיים שדחו את ה-EHS המושתלים.כל חולדות ה-BN הדחו במהירות את השתלי EHT, בעוד שהתאים שרדו בחולדות עם חסר בתאי T. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע את הניתוחים תוך דקות ספורות אם הטכניקה מבוצעת כראוי לאחר הניתוח. ניתן לבצע שיטות נוספות, כגון בדיקות אימונולוגיות והיסטולוגיה, כדי לענות על שאלות אחרות בנוגע לחדירת תאים ותגובה הומורלית.

bioluminescence-imaging-for-assessment-immune-responses-following

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

עם העניין הגובר טיפולים בתאי גזע, טכניקות הדמיה מולקולרית הם אידיאליים עבור התנהגות בתאי גזע ניטור לאחר ההשתלה. הגנים כתב בלוציפראז אפשרו פולשני, הערכה חוזרת של הישרדות התא, מיקום התפשטות in vivo. וידאו זה יהיה להדגים כיצד לעקוב אחר התפשטות hESC בעכבר חי.

במבחנה פליטת אור הדמיה vivo ג&#39;ין הכתב של בתאי גזע עובריים אנושיים

הליך כירורגי עבור משלוח של תא גזע עובריים שמקורם בתאי האנדותל כדי hindlimb איסכמי הוא הוכיח, עם מעקב פולשני על ידי הדמיה פליטת אור.

עובריים, נגזר גזע לתאי אנדותל לטיפול איסכמיה Hindlimb

ההשתלה תוך גולגולתי של תאים לתוך GL261 C57BL / 6 עכברים מייצרת gliomas ממאיר לשחזר רבים מסימני ההיכר של multiforme glioblastoma האדם. השתמשנו GL261 התאים ביציבות להביע בלוציפראז כדי לאפשר לנו...

השרשה תוך גולגולתי עם 3D לאחר In vivo Bioluminescent הדמיה של gliomas Murine

שיטה כדי לעקוב אחר איחוי תא אורגניזמים חיים על פני זמן מתואר. הגישה מנצל...

Cre-P לקס גישה רקומבינציה לצורך זיהוי של Fusion Cell In vivo</em

מאמר זה מתאר רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal של שתלי הסלולר מכרסם במוח באמצעות: (i) ביולומינציה vivo ו הדמיה באמצעות תהודה מגנטית, ו (ב) הודעה מורטם ניתוח היסטולוגית. השילוב בין שיטות הדמיה על חיה אחת מאפשר הערכה שתל נייד עם רגישות גבוהה רזולוציה, וספציפיות.

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

מאמר זה מתאר את הממשל...

הדמיה בקטריאלי bioluminescent<em&gt; In Vivo</em

תאי יונקים המבטאים את קלטת גן פליטת אור...

תאי יונקים האוטונומיים bioluminescent לניטור רציף וזמן אמת של Cytotoxicity

השרשה של biograft לטיפול באוטם שריר לב שנגרם על ידי קשירת LAD במודל מכרסם דרשה כמקובל שני ניתוחי לב פתוח. על מנת להקטין את התמותה ולספק תנאים אופטימליים לקיבוע של biomatrices המוצק והדביק הקשורים לתאים, נהלים פולשנית פותחו.

טיפול המבוסס על תאים לאי ספיקת לב בחולדה: חדר זוגי פתיחת בית החזה לאוטם שריר הלב וepicardial השרשה של תאים וBiomatrix

כאן אנו מציגים שיטה לשימוש צנתר אופטי פנים-חדר בלבבות מעשה כדי לבצע ספקטרוסקופיה ספיגת על פני קיר הלב. הנתונים שהושגו מספק מידע חזק על מתח החמצן ברקמות, כמו גם ניצול מצע ופוטנציאל הממברנה במקביל עם ביצועים מדדים לב בהכנה זו בכל מקום.

מהצד הפנים-לב-אש קטטר אור עבור ניטור מטבוליזם הסלולר באמצעות בליעה בספיגת העבר של הלבבות המגברים

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה וזעיר פולשנית להשתלה והדמיה של תאי NIT-1 בעכברים סוכרתיים שאינם שמנים (NOD) - עכברים משולבים בעלי כשל חיסוני חמור המאותגרים בטחול מטוהר מעכברי NOD סוכרתיים ספונטניים.

ניטור ביולומינסנטי של הישרדות השתל במודל העברה מאומץ של סוכרת אוטואימונית בעכברים

השימוש באור לשליטה בתאי הלב והרקמות מאפשר גירוי ללא מגע, ובכך שומר על המצב והתפקוד הטבעיים של התאים, מה שהופך אותו לגישה בעלת ערך הן למחקר בסיסי והן ליישומים טיפוליים.

מערכת מיקרופיזיולוגית לבבית לחקר התפשטות Ca2+ באמצעות גירוי אופטי לא גנטי

למדו דימות פליטת אור חי לניטור תגובות חיסוניות לאחר השתלת רקמת לב הנדסית בעכברושים. שיטה זו מאפשרת מעקב לא פולשני וארוך טווח אחרי הישרדות השתל ודחייתו.

פליטת אור הדמיה עבור הערכת התגובה החיסונית לאחר השתלת רקמת לב הנדסי (EHT)

גלה סרטונים נוספים