Micro-דיסקציה של מוח החולדה עבור הפקת RNA או חלבון מן אזור מסוים במוח
30 באוגוסט 2007
Micro-לנתיחה במוח חולדה לתוך אזורים שונים מאוד חשוב לחקר מחלות ניווניות שונות. וידאו זה מדגים דיסקציה מיקרו ארבעה אזורים במוח העיקריים כוללים נורת חוש הריח, הקורטקס פרונטלי, היפוקמפוס ו בסטריאטום ברקמת מוח החולדה טרי. עצות שימושיות עבור סילוק מהיר של האזורים השונים, כדי למנוע פירוק חלבונים ו-RNA של הרקמה מקבלים.
שלום, אני קווינט מהמחלקה לאנטומיה באוניברסיטת הונג קונג. היום אני אדגים כיצד לבצע מיקרו-דיסקציה של מוח נמלה לארבעה נתיבים עיקריים: קורטקס פרה-פרונטלי, סטרטום, היפוקמפוס וגורם A. כאן מוצגת תמונה סכמטית המראה כיצד אנו מבצעים את הדיסקציה של המוח.
ישנם שלושה חתכים. מישור החיתוך הראשון נמצא בחיבור שבין הנורה האולפית לקליפה המצחית. מישור החיתוך השני נמצא במיון של הגוף הקורפוס קלוסום.
מישור החיתוך השלישי נמצא בקצה הקדמי של הפוניקס. לאחר שלושה חיתוכים, ייווצרו ארבעה נתיבי מוח. בצד שמאל נמצא גורם.
בצד ימין נמצא ההיפוקמפוס. קליפת המוח הפרונטלית (Frontal cortex) שוכנת בין החתך הראשון לחתך השני. נוקליאז קידוד (Coding nuclease), המהווה חלק מהשכבה (stratum), נמצא בין החתך השני לשלישי בחצי המוח הטרי.
חשוב מאוד לזהות תחילה את ה-corpus callosum ואת ה-pharynx. לאחר מכן נוכל לאתר בקלות את שלושת החתכים. מישור החתך הראשון נמצא בחיבור שבין ה-olfactory bulb לבין הקליפה המצחית (frontal cortex).
מישור החיתוך השני נמצא ברמה של ה-corpus callosum, ומישור החיתוך השלישי נמצא בקצה הקדמי של הפורניקס (fornix). נבצע את נתיחת המוח תחת מיקרוסקופ. כלי הנתיחה נשמרים בקירור על קרח.
לאחר שטיפה של פלטת המתכת במי DEPC קרים, הנחנו את המוח על פלטת המתכת הקרה על ידי חלוקתו לשני חצאי כדור (hemispheres). הפרדנו את התלתל (superior) מהקורטקס הפרונטלי, אספנו אותו ואחסנו אותו בחנקן נוזלי. לאחר מכן, התחלנו באיסוף הקורטקס הפרונטלי. ביצענו חיתוך מסביב לקצה הקדמי של ה-corpus callosum, חתכנו את הקורטקס, אספנו אותו ואחסנו אותו בחנקן נוזלי.
בשלב הבא, נבצע דיסקציה של פריט הקש. נבצע חיתוך במישור הקדמי, של הפיקה ושל סיב הקומיסורה הקדמית, נפריד את הגרעין העוטף, נאסוף אותו ונשמור אותו בחנקן נוזלי. לסיום, נבצע דיסקציה של ההיפוקמפוס.
ראשית, עלינו להסיר את הגשר המוחה כדי לאפשר חשיפה טובה של ההיפוקמפוס. הפרד את ההיפוקמפוס שאסוף ואוחסן בחנקן נוזלי. אזורי מוח שונים קשורים למחלות נוירודגנרטיביות שונות. לדוגמה, ה-stratum קשור למחלת פרקינסון, בעוד שהקורטקס הפרונטלי וההיפוקמפוס קשורים למחלת אלצהיימר.
מיקרו-דיסקציה מדויקת של המוח מאפשרת לנו לזהות שינויים ב-mRNA ובחלבונים באזור זה.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
סרטון זה מדגים מיקרו-דיסקציה של רקמת מוח של חולדה לארבעה אזורים עיקריים: הבצל האולפקטורי (olfactory bulb), הקורטקס הפרונטלי, הסטריאטום וההיפוקמפוס. הסרטון מספק טיפים שימושיים להוצאה מהירה של אזורים אלו כדי למנוע פירוק של RNA וחלבונים.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- מדעי המוח
- נוירו-אנטומיה
- מחלות נוירודגנרטיביות
רקע
- מיקרו-דיסקציה היא קריטית לחקר אזורי מוח.
- הבנת מחלות נוירודגנרטיביות שונות דורשת דגימות רקמה מדויקות.
- שמירה על שלמות ה-RNA והחלבונים חיונית למחקר מדויק.
- במחקר זה נעשה שימוש ברקמת מוח טרייה של חולדה לצורך הדיסקציה.
מטרת המחקר
- להדגמת טכניקות יעילות לדיסקציה של אזורי מוח.
- למתן תובנות לגבי שמירה על איכות הרקמה במהלך הדיסקציה.
- לסיוע במחקר על מחלות נוירודגנרטיביות באמצעות איסוף דגימות נכון.
שיטות שהשתמשו בהן
- מיקרו-דיסקציה של מוח חולדה לאזורים מוגדרים.
- שימוש בתמונות סכמטיות להנחיית תהליך הדיסקציה.
- יישום מישורי חיתוך ספציפיים להסרה מדויקת של אזורים.
- טיפים לצמצום דגרדציה של RNA וחלבונים במהלך הדיסקציה.
תוצאות עיקריות
- ה diseection מוצלח של הפקעת הריח, קליפת המוח הפרונטלית, הסטריאטום וההיפוקמפוס.
- הדגמת טכניקות השומרות על שלמות הרקמה.
- אספקת עזרים חזותיים לשיפור ההבנה של תהליך הדיסקציה.
- הדגשת החשיבות של הסרה מהירה למניעת דגרדציה.
מסקנות
- מיקרו-דיסקציה היא טכניקה בעלת ערך למחקר במדעי העצבים.
- שימוש בשיטות נכונות יכול לשפר משמעותית את איכות דגימות הרקמה.
- טכניקות אלו יכולות לסייע בחקר מחלות נוירודגנרטיביות.
שאלות נשאלות שכיחות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
מיקרו-דיסקציה מדויקת של אזורי מוח בחולדה מאפשרת מיצוי ברמת דיוק גבוהה של RNA וחלבון לצורך אנליזות מולקולריות המשך במחקר על ניוון עצבי. יכולת זו היא קריטית לתיקוף מטרות ולצמצום סיכונים מכניסטיים בקווי גילוי מוקדמים המתמקדים במנגנוני מחלה ספציפיים לאזור. דגימה אזורית מהימנה תומכת ברציפות תרגומית ובקבלת החלטות לגבי פורטפוליו בתהליך גילוי תרופות למערכת העצבים המרכזית (CNS).
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- מאפשר בידוד של אזורי מוח הרלוונטיים למחלה לצורך פרופיל מולקולרי.
- תומך בתיקוף של מטרות פונקציונליות על ידי קישור שינויים ספציפיים לאזור פתולוגיה נוירודגנרטיבית.
- מסייע בהפחתת סיכונים מכניסטיים על ידי אפשור בדיקה מדויקת של היפותזות בהקשרים אנטומיים מוגדרים.
סריקה ופיתוח בדיקה
- מספק דגימות רקמה באיכות גבוהה לפיתוח של בדיקות מולקולריות הניתנות לשחזור.
- מבטיח את שלמות ה-RNA והחלבונים, ובכך תומך בקריאות כמותיות בתהליכי עבודה המשכיים.
- מסטנדרט את הכנת הדגימות, מה שמשפר את יכולת ההשוואה בין הבדיקות ואת אמינות הסריקה.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- מתאים מודלים פרה-קליניים למחלה אנושית על ידי התמקדות באזורי מוח הומולוגיים.
- מאפשר גילוי ותיקוף של ביומרקרים ברקמות רלוונטיות מבחינה אנטומית.
- תומך בקידום מותאם-סיכון באמצעות אספקת נתונים מולקולריים חסונים מאזורים מוגדרים.
שילוב תהליכי עבודה ומסלולי עיבוד
פרוטוקול מיקרו-דיסקציה זה משתלב בממשק שבין שלבי הגילוי המוקדמים למחקר פרה-קליני, ומאפשר ניתוחים מולקולריים ספציפיים לאזורים, המנחים את בחירת המטרה ותיעדוף המועמדים התרופתיים.
- ביולוגיה של תגליות: מאפשרת בחינה מונחית-השערה של מנגנונים ניורודגנרטיביים באזורי מוח מובחנים.
- סריקה: מספקת דגימות סטנדרטיות בעלות שלמות גבוהה לצורך פיתוח בדיקות והערכת תרכובות.
- אנליטיקה: תומכת במדידה כמותית של שינויים ב-RNA ובחלבונים באזורי מוח שונים.
- מחקר תרגומי: מגשרת בין ממצאים פרה-קליניים לרלוונטיות קלינית על ידי התמקדות באזורים המעורבים במחלה.
- שימוש חוזר ברמת הארגון: מבססת תהליך עבודה הדיר לpreparasi של רקמות, הישים בתוכניות מחקר שונות של ה-CNS.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזוי בממצאים מולקולריים ספציפיים לאזור.
- ערך תפעולי: משפר את השחזוריות והסטנדרטיזציה של עיבוד רקמות.
- ערך אסטרטגי: משפר החלטות של go/no-go על ידי הפחתת עמימות ביולוגית בצינורי עבודה של ה-CNS.
- השפעה על הפורטפוליו: מאפשר תעדוף מותאם סיכונים של מטרות למחלות נוירודגנרטיביות.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות אנטומית לצורך זיהוי מדויק של האזור וביצוע הנשף.
- דורש ניהול של שרשרת קירור ועיבוד מהיר כדי לשמר את שלמות ה-RNA והחלבון.
- דורש פרוטוקולים סטנדרטיים להבטחת שחזור בין צוותים שונים.
- עשוי להצריך התאמה עבור מודלי מכרסמים שונים או אזורי מוח שונים.
- תלוי בגישה לכלי נשף ייעודיים ותשתית לקריו-שימור.
