Name: Micro-דיסקציה של מוח החולדה עבור הפקת RNA או חלבון מן אזור מסוים במוח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: למד טכניקות מיקרו-דיסקציה של מוח חולדה לאזורים עיקריים: בולבוס הריח, קורטקס פרונטלי, סטריאטום והיפוקמפוס. שיטה זו שומרת על שלמות RNA וחלבון למחקר מחלות נוירודגנרטיביות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

שלב 1 הקורבן חולדה על פי פרוטוקולים הוקמה. הסר את המוח מהגולגולת ולשטוף אותו קרח קר DEPC טיפול במים מילי Q כדי להסיר כל משטח דם. שלב 2 מניחים על צלחת מתכת קר. חותכים את המוח דו וחצי לתוך הכדור ימינה ושמאלה. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_3/269_Figure-01.png" alt="269_Figure-01" width="474" height="224" /> באיור 1. עמדות חיתוך מהעין המדיאלי של האונה עכברוש שלב 3 אסוף את הנורה חוש הריח מיד לאחר לחתוך הראשונה. פלאש להקפיא את הדגימה בחנקן נוזלי חנות ב -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_4/269_Figure-02.png" alt="269_Figure-02" width="564" height="145" /> איור 2. הנורה חוש הריח לנתיחה שלב 4 איסוף קליפת המוח הקדמית הימנית לאחר לחתוך את השני, באמצעות להב מס &#39;5 דומון מלקחיים. פלאש להקפיא את הדגימה בחנקן נוזלי חנות ב -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_5/269_Figure-03.png" alt="269_Figure-03" width="566" height="220" /> איור 3. דיסקציה הקורטקס פרונטלי שלב 5 אסוף את הסטריאטום (גרעין caudate) מיד לאחר לחתוך השלישית בעזרת שני מלקחיים דומון No.5. פלאש להקפיא את הדגימה בחנקן נוזלי חנות ב -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_6/269_Figure-04.png" alt="269_Figure-04" width="555" height="208" /> איור 4. הסטריאטום (caudate גרעין) דיסקציה שלב 6 כדי לאסוף את ההיפוקמפוס, לשים בצד הגחוני של המוח ולאחר מכן להסיר את המוח התיכון לחשוף את ההיפוקמפוס. מנתחים את ההיפוקמפוס מהקורטקס באמצעות שני דומון מלקחיים No.5. פלאש להקפיא את הדגימה בחנקן נוזלי חנות ב -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_7/269_Figure-05.png" alt="269_Figure-05" width="559" height="191" /> איור 5. ההיפוקמפוס לנתיחה

<ol><li>Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).</li>
<li>Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).</li>
</ol>

החיות טופלו לפי פרוטוקול לשימוש בבעלי חיים במחקר שאושר על ידי הוועדה על השימוש בבעלי חיים בהוראה ומחקר (CULATR) באוניברסיטת הונג קונג על פי המכון הלאומי לבריאות הנחיות לשימוש בבעלי חיים.

אזורי מוח שונים לקשר עם מחלות ניווניות שונות. לדוגמה, קליפת המוח הקדמית ואת בסטריאטום קשורות עם מחלת פרקינסון בזמן של ההיפוקמפוס קשור עם מחלת אלצהיימר. דיסקציה מיקרו מדויק של המוח מאפשר לנו לזהות את ה-mRNA וחלבון שינויים באזור הפגוע באופן מדויק יותר.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלי ניתוח</td><td></td><td></td><td>לוח מתכת, פינצטות, להב וכדומה. עטופים בנפרד בנייר אלומיניום וחוממו ב-180oC למשך שמונה שעות כדי לסלק RNase. קולחלו לטמפרטורה של קרח לפני השימוש.</td></tr></tbody></table>

micro-דיסקציה של מוח החולדה עבור הפקת rna או חלבון מן אזור מסוים במוח

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-לנתיחה במוח חולדה לתוך אזורים שונים מאוד חשוב לחקר מחלות ניווניות שונות. וידאו זה מדגים דיסקציה מיקרו ארבעה אזורים במוח העיקריים כוללים נורת חוש הריח, הקורטקס פרונטלי, היפוקמפוס ו בסטריאטום ברקמת מוח החולדה טרי. עצות שימושיות עבור סילוק מהיר של האזורים השונים, כדי למנוע פירוק חלבונים ו-RNA של הרקמה מקבלים.

Micro-דיסקציה של מוח החולדה עבור הפקת RNA או חלבון מן אזור מסוים במוח

מיקרו-דיסקציה (Micro-dissection) של מוח חולדה לאזורים שונים היא בעלת חשיבות רבה לחקר של מחלות נוירודגנרטיביות שונות. סרטון זה מדגים...

שלום, אני קווינט מהמחלקה לאנטומיה באוניברסיטת הונג קונג. היום אני אדגים כיצד לבצע מיקרו-דיסקציה של מוח נמלה לארבעה נתיבים עיקריים: קורטקס פרה-פרונטלי, סטרטום, היפוקמפוס וגורם A. כאן מוצגת תמונה סכמטית המראה כיצד אנו מבצעים את הדיסקציה של המוח.ישנם שלושה חתכים. מישור החיתוך הראשון נמצא בחיבור שבין הנורה האולפית לקליפה המצחית. מישור החיתוך השני נמצא במיון של הגוף הקורפוס קלוסום.מישור החיתוך השלישי נמצא בקצה הקדמי של הפוניקס. לאחר שלושה חיתוכים, ייווצרו ארבעה נתיבי מוח. בצד שמאל נמצא גורם.בצד ימין נמצא ההיפוקמפוס. קליפת המוח הפרונטלית (Frontal cortex) שוכנת בין החתך הראשון לחתך השני. נוקליאז קידוד (Coding nuclease), המהווה חלק מהשכבה (stratum), נמצא בין החתך השני לשלישי בחצי המוח הטרי.חשוב מאוד לזהות תחילה את ה-corpus callosum ואת ה-pharynx. לאחר מכן נוכל לאתר בקלות את שלושת החתכים. מישור החתך הראשון נמצא בחיבור שבין ה-olfactory bulb לבין הקליפה המצחית (frontal cortex).מישור החיתוך השני נמצא ברמה של ה-corpus callosum, ומישור החיתוך השלישי נמצא בקצה הקדמי של הפורניקס (fornix). נבצע את נתיחת המוח תחת מיקרוסקופ. כלי הנתיחה נשמרים בקירור על קרח.לאחר שטיפה של פלטת המתכת במי DEPC קרים, הנחנו את המוח על פלטת המתכת הקרה על ידי חלוקתו לשני חצאי כדור (hemispheres). הפרדנו את התלתל (superior) מה

micro-dissection-rat-brain-for-rna-or-protein-extraction-from

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרופיל ביטוי של RNA מאזורים מובחנים במוח של עכבר דורש אסטרטגיה מדויקת וחזרתית לאיסוף רקמות. כאן מתואר פרוטוקול המשתמש הן בחיתוך קורונלי של המוח והן במיקרודיסקציה בעזרת מחלל רקמות (tissue corer). התנובה והאיכות של ה-RNA הכולל שהתקבל מהדגימות שהופקו מאשרות את יעילותו של המהלך המתואר.

Non-לייזר מיקרוסקופית לכידת גישה עבור Microdissection של אזורים במוח דיסקרטית עכבר עבור בידוד RNA סך סידור Downstream הדור הבא והביטוי פרופיל גנטי

אנו מתארים מודל עכברים של הפרעת פוסט טראומטית (PTSD) החושפת את השינויים המתמשכים בתפקוד נוירואנדוקריניים ותגובה המאוחרת לטווח ארוך, המוגזמת פחד, אופייניים לחולי PTSD. מודל החיה ושיטות שתוארו כאן הם שימושיים עבור correlating סמנים ביולוגיים בגרעיני מוח, שהם מכאניים אך לא ניתן למדוד בחולים, עם סמנים ביולוגיים בתאי דם לבן בפריפריה, שיכול.

סמנים ביולוגיים במודל חיה לחשיפה קושרת עצבית, המטולוגית, והתנהגות של PTSD

סרטון זה מדגים את תהליך בידוד כלי הדם במוח מחולדות שעברו המתת חסד. הוא כולל דיסקציה של המוח, ניקוי הרקמה, ועיכול מכני, ואחריו צנטריפוגה חוזרת ונשנית כדי לבודד את החלק הטהור של microvessels.

שיטה לבידוד יחידות נוירו-וסקולריות ממוח חולדה

סרטון זה מדגים את הזיהוי של סינתזת RNA של קולטני סרוטונין באמצעות בדיקות אוליגונוקלאוטידים ברקמת מוח של חולדות המושפעות מתסמונת סרוטונין. הפרוטוקול כולל טיפול מקדים ברקמות, הכלאת בדיקה וזיהוי אנזימטי כדי לדמיין ולכמת את ביטוי ה-RNA של קולטני סרוטונין במיקרוסקופ.

הכלאה באתרה באמצעות בדיקות אוליגונוקלאוטידים לחקר ביטוי RNA בחלקי מוח של חולדות

ניתוח ביטוי גנים של תת-קבוצה של תאים ברקמה ספציפית מהווה אתגר גדול. מאמר זה מתאר כיצד לבודד RNA הכולל באיכות גבוהה מאוכלוסיית תאים ספציפית על ידי שילוב של שיטת immunolabeling מהירה עם microdissection ללכוד לייזר.

בידוד RNA מן אוכלוסיות תאים ספציפיות באמצעות Microdissection לייזר ללכוד בשילוב עם ראפיד immunolabeling

. הנה, מתוארת שיטה עבור בידוד של עכברוש המוח microvessels, הכנת דוגמאות ממברנה. פרוטוקול זה יש יתרון ברור של הפקת microvessel מועשר דגימות עם חלבון מקובל תשואה של חיות בודדות. דוגמאות יכול לשמש לאחר מכן עבור ניתוחים חלבון חזקה על אנדותל microvascular המוח.

שיטה פשוטה לשחזור כדי להכין ממברנה דגימות מן החולדה טרי מבודד המוח Microvessels

אנו מספקים פרוטוקול עבור בידוד של מיקרוגלייה מאזורים בגזור שונים של המוח העכבר באמצע המחצית, ואחריו הכנה חצי אוטומטי הספריה לרצף העמוק של RNA תא בודד של טרנססקריפט באורך מלא. שיטה זו תסייע להבהיר טרוגניות תפקודית של מיקרוגלייה בריאות ומחלות.

בידוד של אזור-מיקרוגליה ספציפי מתוך חצי הכדור השני של המוח העכבר עבור רצפי RNA של תא יחיד בודד

הליך זה מתאר את אוסף אזורי המוח קפוא בנפרד כדי להשיג חלבון באיכות גבוהה ו-RNA באמצעות כלים זולים וזמינים בדרך כלל.

אוסף של אזורים קפואים המוח מכרסם עבור ניתוח במורד הזרם

אנו מציגים פרוטוקול מהיר, שלב אחר שלב, להסרת מוח עכבר ודיסקציה של אזורים בדידים מרקמת מוח טרייה. השגת אזורי מוח לניתוח מולקולרי הפכה לדבר שבשגרה במעבדות רבות למדעי המוח. אזורי מוח אלה מוקפאים באופן מיידי כדי לקבל נתוני תעתיק באיכות גבוהה לניתוח ברמת המערכת.

מיקרו-דיסקציה של מוח העכבר לאזורים שונים מבחינה תפקודית ואנטומית

השילוב של מיקרו-דיסקציה של לכידת לייזר ו-RT-qPCR מיקרופלואידי מספק ספציפיות אנטומית וביוטכנית במדידת השעתוק בתאי עצב בודדים ובגליה. יישום שיטות יצירתיות עם הגישה הביולוגית של המערכת למחלות פסיכיאטריות עשוי להוביל לפריצות דרך בהבנה ובטיפול כגון השערת נוגד התגמול של דלקת עצבית בהתמכרות.

חקירת מניעים של אנטי-פרסורה בהתנהגות התמכרות באמצעות שיטות ביטוי גנים חד-תאיות ספציפיות אנטומית

למד טכניקות מיקרו-דיסקציה של מוח חולדה לאזורים עיקריים: בולבוס הריח, קורטקס פרונטלי, סטריאטום והיפוקמפוס. שיטה זו שומרת על שלמות RNA וחלבון למחקר מחלות נוירודגנרטיביות.

Micro-דיסקציה של מוח החולדה עבור הפקת RNA או חלבון מן אזור מסוים במוח

גלה סרטונים נוספים