Name: אפיון מבודד, מאוורר ריאות, instrumented ועכבר perfused עם תזרים pulsatile (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-29T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: למדו לבודד ולהזרים ריאות עכבר במערכת מכוונת לחץ וזרימה פולסטילית. שיטה זו מאפשרת למדוד יחסי לחץ-זרימה ריאתיים ולהעריך את העומס על החדר הימני בלב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי מכוני הבריאות הלאומיים מענק R01HL086939 (NCC).

<ol><li>Pace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+control+of+pulmonary+vascular+impedance+in+anesthetized+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Sympathetic control of pulmonary vascular impedance in anesthetized dogs.</a> Circ Res. 29, 555-568 (1971).</li>
<li>Ewalenko, P., Stefanidis, C., Holoye, A., Brimioulle, S., Naeije, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+impedance+vs.+resistance+in+hypoxic+and+hyperoxic+dogs%3A+effects+of+propofol+and+isoflurane%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular impedance vs. resistance in hypoxic and hyperoxic dogs: effects of propofol and isoflurane.</a> J Appl Physiol. 74, 2188-2193 (1993).</li>
<li>Nichols, W. W., O'Rourke, M. F., Hartley, C., McDonald, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNichols%2C+WW+%22McDonald%27s+blood+flow+in+arteries+%3A+theoretical%2C+experimental%2C+and+clinical+principles%22">McDonald's blood flow in arteries : theoretical, experimental, and clinical principles</a>. , 5th edn, Arnold. (2005).</li>
<li>Tuchscherer, H. A., Webster, E. B., Chesler, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+Vascular+Resistance+and+Impedance+in+Isolated+Mouse+Lungs%3A+Effects+of+Pulmonary+Emboli%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Pulmonary Vascular Resistance and Impedance in Isolated Mouse Lungs: Effects of Pulmonary Emboli.</a> Annals of Biomedical Engineering. 34, 660-668 (2006).</li>
<li>Tuchscherer, H. A., Vanderpool, R. R., Chesler, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+remodeling+in+isolated+mouse+lungs%3A+Effects+on+pulsatile+pressure-flow+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular remodeling in isolated mouse lungs: Effects on pulsatile pressure-flow relationships.</a> Journal of Biomechanics. 40, 993-1001 (2007).</li>
<li>Vanderpool, R., Naeije, R., Chesler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impedance+in+Isolated+Mouse+Lungs+for+the+Determination+of+Site+of+Action+of+Vasoactive+Agents+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Impedance in Isolated Mouse Lungs for the Determination of Site of Action of Vasoactive Agents and Disease.</a> Ann Biomed Eng. , (2010).</li>
<li>Vanderpool, R., Kim, A., Molthen, R., Chesler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+acute+rho+kinase+inhibition+on+chronic+hypoxia-induced+changes+in+proximal+and+distal+pulmonary+arterial+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of acute rho kinase inhibition on chronic hypoxia-induced changes in proximal and distal pulmonary arterial structure and function.</a> Journal of Applied Physiology. , (2010).</li>
<li>El-Bizri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+protein+22alpha-mediated+patchy+deletion+of+Bmpr1a+impairs+cardiac+contractility+but+protects+against+pulmonary+vascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle protein 22alpha-mediated patchy deletion of Bmpr1a impairs cardiac contractility but protects against pulmonary vascular remodeling.</a> Circ Res. 102, 380-388 (2008).</li>
<li>Champion, H., Michelakis, E., Hassoun, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+invasive+and+noninvasive+approach+to+the+right+ventricle-pulmonary+circulation+unit%3A+state+of+the+art+and+clinical+and+research+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Comprehensive invasive and noninvasive approach to the right ventricle-pulmonary circulation unit: state of the art and clinical and research implications.</a> Circulation. 120, 992-1007 (2009).</li>
<li>Gan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasively+assessed+pulmonary+artery+stiffness+predicts+mortality+in+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Noninvasively assessed pulmonary artery stiffness predicts mortality in pulmonary arterial hypertension.</a> Chest. 132, 1906-1912 (2007).</li>
<li>Mahapatra, S., Nishimura, R., Sorajja, P., Cha, S., McGoon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+pulmonary+arterial+capacitance+and+mortality+in+idiopathic+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Relationship of pulmonary arterial capacitance and mortality in idiopathic pulmonary arterial hypertension.</a> J Am Coll Cardiol. 47, 799-803 (2006).</li>
<li>Bogaard, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+pulmonary+artery+pressure+elevation+is+insufficient+to+explain+right+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Chronic pulmonary artery pressure elevation is insufficient to explain right heart failure.</a> Circulation. 120, 1951-1960 (2009).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

צעדים קריטי הניתוח זה קריטי, כי הטיפול נלקח כאשר חותך את הצלעות מן הריאות. הריאות חייב להיות חשוף באופן מלא מעצורים על ידי הרקמות הסובבות במהלך האינפלציה, אך לא נפגע במהלך תהליך של בידוד. השימוש של אובייקט שטוח כמו בקצה האחורי של מלקחיים ניתן להשתמש כדי להחזיק את הריאות מן הקיר החזה, כך שיש נתיב ברור מספריים לגזור. עוד צעד קריטי הוא המיקום של תפר סביב עורק הריאה לבין אבי העורקים. בעזרת פינצטה ישר הקהה תפחית את הסיכו...

<table><tbody><tr><td>מזרק של 1 מ"ל</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-829-10F</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 10 מ"ל</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-2A</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 60 מ"ל</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-689-8</td><td></td></tr><tr><td>RPMI עם GLN 6/PK</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT10040CV</td><td></td></tr><tr><td>מסנני פיה לבקבוק</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-761-57</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll PM 70</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2878-100g</td><td></td></tr><tr><td>הפרין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Y27632</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Y0503</td><td></td></tr><tr><td>מספרי איריס עם קצוות כדוריים וזוויתית</td><td>Fine Science Tools</td><td>14109-09</td><td></td></tr><tr><td>מספרי קפיץ של ואנאס (Vannas Spring Scissors) - להבים של 4 מ"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>מספרי איריס עדינים - ישרים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14106-09</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה Dumont #5/45</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>פינצטות Dumont Medical Biology</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Lauda E100 ECO-line 003 </td><td>VWR international</td><td>מקביל ל-Lauda-Brinkmann E-103, 62400-922</td><td></td></tr><tr><td>מערכת ריאה של עכבר בבידוד ובפרפוזיה ל-IL-1 </td><td>Harvard Apparatus</td><td>739904</td><td></td></tr><tr><td>מתמר לחץ דם P75 עבור מודול PLUGSYS</td><td>Harvard Apparatus</td><td>730020</td><td></td></tr><tr><td>מודולי זרימה TS410</td><td>טרנסוני (מהירות על-קולית חלקית)</td><td>TS410</td><td></td></tr><tr><td>חיישני זרימה בקו (Inline Flowsensors) מדויקים מסדרת ME 4 PXN Precision PXN</td><td>טרנסוני</td><td>ME 4 PXN</td><td></td></tr><tr><td>משאבות מרובת-מזרקים של Cole-Parmer</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-74900-20</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקון Nembutal בריכוז 50MG/ML, נפח 20ML</td><td>Amatheon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

אפיון מבודד, מאוורר ריאות, instrumented ועכבר perfused עם תזרים pulsatile

Characterization of the Isolated, Ventilated, and Instrumented Mouse Lung Perfused with Pulsatile Flow

מבודד, מאוורר instrumented הכנה עכבר הריאות מאפשר יציב pulsatile כלי דם ריאתי לחץ זרימה יחסים כדי להימדד עם שליטה עצמאית על שיעור ריאתי עורקי זרימה, קצב זרימת waveform, לחץ האוויר ואת הלחץ פרוזדורים שמאל. התנגדות כלי דם ריאתי מחושב על בסיס ריבוי נקודות, לחץ זרימת עקומות יציב; עכבה כלי דם ריאתי מחושב מלחץ זרימת עקומות pulsatile להשיג בחנות מגוון רחב של תדרים. כמו מוכר עכשיו קלינית, עכבה היא מדד מעולה של afterload חדרית הזכות מאשר התנגדות משום שהיא כוללת את ההשפעות של ציות כלי הדם, אשר אינן זניחות, במיוחד במחזור ריאתי. שלושה מדדים חשובים של עכבה - אפס הרץ עכבה Z 0, העכבה האופיינית Z C, מדד גל השתקפות R W - לספק תובנה באזור דיסטלי חתך עורקי עבור זרימה, קשיות העורקים הפרוקסימלי ואת עכבה במעלה הזרם, במורד הזרם אי התאמה, בהתאמה. כל התוצאות שהתקבלו מבודד, מאוורר והריאות perfused שאינן תלויות הטון האוהד של מערכת העצבים, מצב עוצמת ההשפעה של הרדמה. השתמשנו בטכניקה זו כדי לכמת את ההשפעה של תסחיפים ריאתי היפוקסיה כרונית על התנגדות עכבה, וכדי להבדיל בין אתרי פעולה (כלומר, לעומת הפרוקסימלית הדיסטלית) של סוכנים vasoactive ומחלות באמצעות תלות בלחץ של Z-C. יתר על כן, כאשר טכניקות אלה משמשים עם הריאות של זנים מהונדסים גנטית של עכברים, תופעות של ליקויים ברמה המולקולרית על מבנה כלי הדם ואת תפקוד ריאתי ניתן לקבוע.

פרוטוקול הבא מתאר את התהליך של בידוד, איוורור ו instrumenting הריאות העכבר כדי למדוד יציב או pulsatile לחץ הדם הריאתי זרימה יחסים כדי לכמת את ההשפעות של זרימת הדם, זרימת אוויר, שינויים בדרכי הנשימה ושינויים בכלי הדם על afterload חדרית הנכון.

הכנת ריאות עכבר מבודדות, מאווררות ומצוידות במכשור מאפשרת מדידה של יחסי לחץ-זרימה כלי-דמי ריאתיים במצב קבוע ובמצב פולסטילי...

לבדיקת קשרי זרימה של לחץ ריאתי פולסטילי. פרוטוקול זה מסביר כיצד לבודד, להנשים ולבצע פרפוזיה לריאות של עכבר. הקנה נחשף בניתוח לצורך הנשמה.לאחר מכן מבודדים את הלב והריאות כדי שניתן יהיה לבצע קנולציה לעורק הריאתי ולשליא השמאלית. לאחר מכן מבצעים פרפוזיה למערכת הריאתית. הניסויים מבוצעים על ידי שינוי של הזרימה בעורק הריאתי, עוצמתה, צורת הגל שלה ו/או התדירות שלה.צורות גלי הלחץ המתקבלות בעורק הריאתי ובעליה השמאלית נרשמות ומדגימות את קשרי זרימת הלחץ הפולסטיליים בריאות. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון תכשירים in vivo, הוא שניתן להשיג קשרי זרימת לחץ פולסטיליים ללא שינויים במצב הנפח, בטון של מערכת העצבים הסימפתטית, בפעילות ובשפעות ההרדמה.בנוסף, רוב תכונות הריאות המבודדות מודדות רק קשרי זרימה-לחץ קבועים, בעוד שהטכניקה שלנו מאפשרת לקבוע קשרי זרימה-לחץ פולסטיליים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הפיזיולוגיה הריאתית, כגון כיצד מחלה וסקולרית ריאתית משפיעה על המודינמיקה הריאתית הפולסטילית, או כיצד הקשחה של העורק הריאתי הגדול משפיעה על העומס לאחר-טעינה של החדר הימני? הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן חשיפת הלב והריאות וקיבוע הקנולה בעורק הריאתי הם שלבים שקשה ללמוד.לחץ עודף ממכשירי המדידה עלול לגרום לבבקה בריאות, ומיקום שגוי של הקניולה עלול לגרום לנקב בעורק הריאה. לפני תחילת הניסוי, יש להכין את מערכת ה-IL one המשמשת להנשמה ולפרפוזיה של הריאה המבודדת. יש לחבר את הצינורות לממירים הלחציים.השתמש במשאבה אחת ובמד זרימה כדי לשטוף לחלוטין את המערכת במים מזוקקים המחוממים ל-37 °C, והסר בועות אוויר מהצינורות. לאחר מכן, בצע ה priming לצינורות המשאבה של ה-Endur tech באמצעות 1%PBS. כעת בצע איפוס (zero).מדדו את הלחץ עבור כל מתמר P 75 תחילה על ידי סגירת השסתום שלו למערכת ה-IL one ופתיחת השסתום שלו לאטמוספירה. לאחר מכן, השתמשו במגבר ה-SIS plug כדי לאפס את הלחץ באופן אוטומטי. לפני הכנת בעל החיים, לחחו את מערכת ה-IO one על ידי השריה של פיסת הקרמיקה הנקבובית במים מזוקקים. לאחר הרדמת העכבר, ייצבו את העכבר לניתוח על ידי קיבוע כפות רגליו הקדמיות ללוח שעם.כעת רסס את החזה ב-95% alcohol. השתמש בפינצטה ישרה כדי לתפוס את העור באזור הצוואר וגזור פתח של סנטימטר אחד באמצעות המספריים הישרים. לאחר חשיפת החלק הפנימי של הצוואר, הסר רקמה בלוטית לבנה בשרירים השטחיים תוך חיפוש אחר הוושט והקנה.בודד את הוושראות ואת קנה הנשימה מהרקמות משני הצדדים ומאחור, וקשור תפר רפוי מסביב לקנה הנשימה. כדי לבצע קניולציה של קנה הנשימה, גזור בזהירות חריץ קטן בצורת V באחד מצדדיו בעזרת המספריים הקטנים. כעת העבר את העכבר למערכת ה-IL one באמצעות פינצטה קהה.קחו את הקניולה הקנה והחליקו אותה לתוך הקנה. הדקו את הקניולה באמצעות תפר. התחילו את ההנשמה תחילה באוויר חדר, רססו את החזה באלכוהול והסירו את העור באמצעות פינצטה ישרה ומספריים ישרים.גזרו את העור כלפי מעלה לאורך עצם הסטרנום (sternum). הרימו את העור בכל צד וגזרו לאורך קו הצלעות התחתונות. כעת אחזו בתהליך הזיפואיד (xiphoid process) בעזרת פינצטה והשתמשו במספריים בעלי קצה כדורי כדי לגזור חור בסרעפת בנקודת המפגש שלה עם חלקו התחתון של הסטרנום.תפסו את הסרעפת וגזרו אותה מהצלעות. באמצעות מספריים בעלי קצה כדורי, תפסו שוב את התהליך החרב (xiphoid process) והשתמשו במספריים בעלי הקצה הכדורי כדי לגזור בזהירות את עצם החזה כלפי מעלה דרך הצלעות, תוך הקפדה לא לפגוע בריאות, בלב או בכלי הדם. כדי לחשוף את הלב, תפסו את הצלעות השמאליות וגזרו את קצותיהן.כעת הזרקו באיטיות לחדר הימני 0.1 milliliters של heparin. לאחר ההזרקה, גזרו את שאר הצלעות. השתמשו בחלק האחורי או בקצה המעוגל של הפינצטה כדי לדחף בעדינות את הריאות הרחק מהצלע בזמן גזירת הצלעות תחת מיקרוסקופ. הסירו רקמה בלוטית מהשומן שמעל הלב.השתמשו בפינצטה כדי להרחיק את הרקמות וגזרו אותן. כדי להניח תפר סביב האורטה ועורק הריאה באמצעות מספרי קפיץ, הרימו בעדינות את הלב בעזרת פינצטה קהה. לא אמורה להיות התנגדות רבה.כעת קשרו תפר רפוי באמצעות קשירה כפולה. לאחר מכן, גזרו את הבטן התחתונה. השתמשו במספריים זוויתיים כדי לגזור דרך הצלעות ועמוד השדרה.פעולה זו תגרום לזרימה משמעותית של דם. השתמשו במקלון צמר גפן (Q-tip) כדי לעצור את הזרימה. לאחר שהזרימה של הדם פסקה, הכינו (prime) את מערכת ה-IL באמצעות ארבעה מיליליטרים של RPMI ממזרק מלא ב-10 מיליליטרים של RPMI.מומלץ לוודא שאין בועות בתוך הפיתול. כעת בצעו קניולציה של החדר הימני על ידי חיתוך חריץ קטן ליד השיא (apex) והחדרת הקניולה. כוונו כלפי מטה אל תוך החדר הימני כדי להגיע לעורק הריאתי. קצה הגשש צריך להיות נראה דרך הדופן השקופה למדי של העורק הריאתי.לאחר מכן, הדק את התפר סביב הקנולה, האורטה והעורק הריאתי כדי לבצע קנולציה של החדר השמאלי. חתוך חריץ בשיא הלב (apex) והכנס את הקנולה בכיוון מעלה לעבר העליה השמאלית. ייתכן שיהיה צורך במעט לחץ כדי למצוא את המסתם, אך ברגע שיימצא, הקנולה תחליק פנימה ותישאריציבה ללא צורך בתפר.הזרם ידנית RPMI ממזרק ה-10 milliliter בקצב של 0.3 milliliters לדקה עד שתראה זרימה בצינור המוצא. אם אין זרימה בצינור המוצא, מנח מחדש את קנולת החדר השמאלי. עם זאת, אם אין זרימה בריאות, הפסק את הניסוי מכיוון שסביר להניח שיש דליפה בעורק הריאתי.כעת, לאחר שהלב קנולירט במלואו, חברו את המזרק בנפח 60 מיליליטר למערכת ה-IL one. השתמשו במשאבת זרימה קבועה והזרים את ה-RPMI Perfuse eight בקצב של 1 מיליליטר לדקה. בדקו אם קיימות דליפות במהלך הפרפוזיה הראשונית.בצעו פרפוזיה הדרגתית של הריאות למשך שתי דקות נוספות, במהלכן הריאות יהפכו ללבנות. עבור מחקרי זרימה פועמת (pulsatile flow), הגדירו תחילה את מעתק הבוכנה של המשאבה הבודדת לרמות הרצויות.לאחר מכן הגדירו את קצב הזרימה הקבוע. כעת פתחו את השסתום למשאבת ה-osli והתחילו להקליט נתונים רגע לפני הרצת פרופיל הזרימה של ה-osli. עם הסיום, פתחו את קובץ פלט הנתונים ושרטטו את הזרימה הניסויית בהתבסס על הזרימות הניסוייות מהניסוי הראשוני.כווננו את תזוזת בוכנת משאבת התנודה בכל תדר כך ש-Q max יהיה לפי הרצוי. שמרו על אוורור בלחץ קבוע. במהלך איסוף נתונים עבור ניסויי זרימה רציפה, סגרו את השסתום למשאבה הבודדת והגדירו את קצב הזרימה הרציפה לרמה הרצויה. התחילו בהקלטת נתונים ועברו דרך פרוטוקול הזרימה הרציפה.איסוף נתונים למשך 10 שניות לפחות בכל קצב זרימה בין הניסויים. הגדירו מחדש את קצב הזרימה ל-0.5 milliliters per minute. הקפידו לשמור על לחץ אוורור קבוע במהלך איסוף הנתונים.אם ברצונכם לבצע ניסויים שבהם לחץ העליה השמאלית הוא אפס, הסירו את צינור הניקוז בזמן ביצוע הניסויים. עקבו בדריכות אחר הגעת RPMI לצינורות נתיבי הנשימה. אין לאפשר ל-RPMI להגיע למתמירים של לחץ נתיבי הנשימה, שכן הדבר יגרום לנזק להם.להלן תוצאות של פרפוזיה בזרימה קבועה, כאשר השורה העליונה מציגה את ספיקת הזרימה Q והשורה השנייה מציגה את לחצי העורק הריאתי והעלייה השמאלית תחת תנאים שונים. בשני הפאנלים הראשונים, הלחץ בעלייה השמאלית עלה וירד בהתאם ל-Q מכיוון שצינור המוצא היה במקומו; הפאנל הראשון מראה לחץ אוויר בסוף נשיפה, לחץ שאיפה, והשני מראה לחץ אוויר בסוף נשיפה. לאחר מכן, הוסר הצינור כך שהלחץ בעלייה השמאלית היה קבוע ובלתי תלוי ב-Q. לאחר מכן, גובה צינור המוצא הותאם ידנית כך שהלחץ בעלייה השמאלית היה גבוה יותר.אך ללא קשר ל-Q שוב, הפנל הראשון מציג לחץ אוויר בסוף נשימה, לחץ שאיפה, והשני מציג לחץ אוויר בסוף נשיפה. את קשרי זרימת לחץ העורק הריאתי היציבים שמתקבלים לכל מקרה ניתן להשיג על ידי שרטוט הלחץ לעומת הזרימה.להלן תוצאות הפרפוזיה בזרימה פולסטילית, כאשר ספיקת הזרימה Q מוצגת בלוח העליון, ובלוח התחתון מוצגים הלחצים הנובעים מכך בעורק הריאה, בעלייה השמאלית ובאוויר. מיחסי זרימה ולחץ פולסטיליים אלו בעורקי הריאה, ניתן לחשב את העכבה הווסקולרית הריאתית, המשקפת את סך העומס שלאחר התכווצות (afterload) של החדר הימני.לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע אותה תוך 20 עד 30 דקות. במהלך ביצוע הפרוצדורה, חשוב להקדיש את הזמן הדרוש ולהרגיש נינוח כדי להבטיח ידיים יציבות. ברגע שהריאות מופרסות כראוי, החלק הקשה מסתיים.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע טכניקות נוספות כגון היסטולוגיה או בדיקות ביוכימיות ברקמת הריאה כדי לענות על שאלות נוספות, כגון אילו מנגנונים מולקולריים אחראים לשינויים שנצפו ביחסי זרימת הלחץ הפולסטילי הריאתי. טכניקה זו סוללת את הדרך עבור חוקרים בתחום הפיזיולוגיה הריאתית לבחון את תפקידם של גנים וחלבונים ספציפיים בהתפתחות ובהחמרה של מחלות וסקולריות ריאתיות באמצעות שימוש בעכברים שעברו שינוי גנטי.

characterization-isolated-ventilated-instrumented-mouse-lung-perfused

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מציג טכניקת ex vivo לזילוח ריאות מבודד. זהו כלי למחקר ריאתי שיסייע במחקרים של מנגנונים פיזיולוגיים ופתולוגיים שונים המעורבים בהליכי השתלת ריאה.

זילוח ריאות Ex vivo: טכניקה לחקר ריאות במודל ארנב

איזוקונסטריאקציה ריאתי היפוקסית (HPV) היא תופעה פיזיולוגית חשובה שבאמצעותה ב זלוף ריאות היפוקסיה מכתשי מותאם אוורור. מגזר כלי הדם העיקרי התורם ל- HPV הוא העורק התוך-אציני. כאן, אנו מתארים את הפרוטוקול שלנו לניתוח של HPV של כלי ריאות מורין עם קטרים של 20-100 מיקרומטר.

ניתוח וידאומורפומטרי של Vasoconstriction ריאתי היפוקסי של עורקים תוך ריאתי באמצעות מוריס דיוק לחתוך פרוסות ריאות

הכנת ריאות perfused הדם המבודדת עושה את זה אפשרי לדמיין רשתות microvessel על פני הריאות. כאן אנו מתארים גישה לכמת חדירות של microvessels אחת ריאות מבודדות באמצעות דימות פלואורסצנטי זמן אמת.

כימות יחיד כלי דם קטנים בחדירות מבודדת-perfused דם עכברוש ריאות הכנה

Ex-Vivo ריאות זלוף (EVLP) אפשר השתלת ריאות בבני אדם להפוך לזמינה יותר בכך שיאפשר את היכולת להעריך איברים ולהרחיב את המאגר התורם. כאן אנו מתארים את הפיתוח של תכנית EVLP חולדה וחידודים המאפשרים למודל לשחזור להתרחבות עתידית.

שיטה של ​​מבודד<em&gt; Ex Vivo</em&gt; ריאות זלוף במודל עכברוש: ​​לקחים מפיתוח תכנית EVLP עכברוש

מטרת שיטה זו היא להציג שיטה פשוטה ויעילה עבור זלוף, אינפלציה, קיבוע של ריאות העכבר לבדיקת פתולוגיה גידול ריאות והערכת גרורות לריאה.

זלוף ואינפלציה של ריאת העכבר עבור היסטולוגיה גידול

הכנת ריאות ארנב מבודד הוא כלי סטנדרטי זהב במחקר ריאתי. פרסום זה נועד לתאר את הטכניקה כפי שפותחה לחקר מנגנונים פיזיולוגיים ופתולוגיים המעורבים בתגובה בדרכי הנשימה, שימור ריאות ומחקר פרה-אקליני בהשתלת ריאות ובבצקת ריאות.

מערכת זלוף ריאות מבודדת במודל הארנב

מאמר זה מתאר מודל חזירי של זילוח ריאות בלחץ שלילי ex situ , כולל רכש, התקשרות וניהול בפלטפורמה בהתאמה אישית. הדגש נעשה על טכניקות הרדמה וכירורגיות, כמו גם פתרון בעיות.

אוורור לחץ שלילי נורממי זילוח ריאות Ex Situ : הערכת תפקוד הריאות וחילוף החומרים

ריאות Ex vivo שימושיות עבור מגוון ניסויים לאיסוף נתונים פיזיולוגיים תוך התעלמות מהמשתנים המבלבלים של ניסויי in vivo. הגדרות מסחריות הן לעתים קרובות יקרות ומוגבלות בסוגי הנתונים שהן יכולות לאסוף. אנו מתארים שיטה לבניית מערך מודולרי לחלוטין, הניתן להתאמה לעיצובי לימוד שונים.

תכנון ויישום של מודל זילוח ריאות Rat Ex Vivo

מערכת זילוח כבד נורמותרמית ex vivo (NEVLP) נוצרה עבור כבדי עכברים. מערכת זו דורשת ניסיון במיקרו-כירורגיה אך מאפשרת תוצאות זילוח הניתנות לשחזור. היכולת להשתמש בכבדים של עכברים מאפשרת לחקור מסלולים מולקולריים לזיהוי תוספי פרבוסט חדשים ומאפשרת ביצוע ניסויים המתמקדים בתיקון איברים.

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

כאן, אנו מתארים את השלבים הדרושים להקמת מודל EVLP של חולדות ומראים את הפרופיל הדלקתי הקשור לריאות המועברות. המטרה היא להפיץ ידע וחוויות על מודל EVLP של חולדות, ולאפשר הבנה אינטגרלית של התגובות הביולוגיות הקשורות לטכניקה מהפכנית זו.

הקמת מודל חולדה לזלוף ריאות ex vivo לתובנות תרגומיות בהשתלת ריאות

המטרה היא לפתח מודל חדש של זלוף ריאות ex vivo (EVLP) בחולדות שיכול לשמור על תפקוד ריאות עקבי במשך 4 שעות לאורך EVLP ולספק לתעשייה פרטי יישום שיציע שיטה יציבה ליישום EVLP על מודלים של מכרסמים.

הקמת מערכת זילוף ריאות ex vivo חדשה לריאות חולדות לאחר מוות במחזור הדם

למדו לבודד ולהזרים ריאות עכבר במערכת מכוונת לחץ וזרימה פולסטילית. שיטה זו מאפשרת למדוד יחסי לחץ-זרימה ריאתיים ולהעריך את העומס על החדר הימני בלב.

אפיון מבודד, מאוורר ריאות, instrumented ועכבר perfused עם תזרים pulsatile

גלה סרטונים נוספים