26 בספטמבר 2012
עבודה בצורה בטוחה ואנושית עם מכרסמי מחקר דורשת מיומנות ליבה בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בצורה בטוחה ויעילים לנהל תרכובות לעכברים וחולדות.
המטרה הכללית של הסרטון הבא היא להכיר לצופה טכניקות שונות המשמשות לריסון ידני ולהגשת תרכובות בעכברים ובחולדות. ניתן לרסן עכברים וחולדות באמצעות מספר טכניקות של יד אחת או שתי ידיים, או באמצעות שימוש במרסנים מפלסטיק, וכן להשתמש בטכניקות להגשת תרכובות, כגון הזרקה תוך-פריטונית, תת-עורית, תוך-כלית (אינטרה-וסקולרית) ותוך-עורית. בסרטון זה מודגמות שיטות הזרקה, כמו כן הגשה דרך פה (oral gavage) והגשה תוך-אפית.
למידה כיצד לטפל בבעלי חיים בביטחון, בעדינות ובבטיחות היא חלק חשוב ממחקר in vivo. יש לטפל בבעלי חיים תמיד באופן שהוא בטוח הן עבור בעל החיים והן עבור החוקר. בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בשיטות אלו עשויים להתקשות, שכן נדרש זמן עד להגעה לתחושת נוחות בעבודה עם מכרסמים.
מכרסמים עשויים גם להרתיע או להפחיד אנשים שאינם מנוסים בעבודה איתם. הדגמה חזותית של מתן המינון ושל טכניקות ריסון היא מפתח הן למתן מוצלח של התרכובת והן למניעת מצוקה או פגיעה בבעל החיים ובמרסן.
השלב הראשון בשתי השיטות הוא הרמה עדינה של העכבר בבסיס הזנב אל סורגי מכסה הכלוב, או למשטח מחוספס דומה. עבור הטכניקה של יד אחת, הכניסו את בסיס הזנב בין האצבע השלישית לרביעית תוך써 משיכה עדינה של הזנב לאחור. פעולה זו תגרום לעכבר לאחוז במשטח ולמשוך את עצמו קדימה.
לאחר מכן, אחזו בחוזקה. תפסו את העכבר בעורף בעזרת אותה יד המחזיקה את הזנב. אחזו עם האצבע והבוהן ליד בסיס הראש, והרחיבו את האחיזה במורד הגב על ידי שילוב האמה והקמיצה.
יש להפעיל לחץ מדויק על העור מסביב לצוואר כדי למנוע מהעכבר להסתובב או להתפתל, אך לא במידה שתמנע מהבעל חיים לנשום. הטכניקה הדו-ידנית דומה, פרט לכך שבעוד יד אחת מושכת בעדינות את הזנב לאחור, היד השנייה תופסת במהירות ובחוזקה את העכבר בעורף, כאשר הזנב ביד אחת והעורף ביד השנייה. הרם את העכבר והצמידו את בסיס הזנב בין כף היד לבין האצבע השלישית או הרביעית של היד המחזיקה בעורף.
כמו קודם, וודאו שהאחיזה מאובטחת, אך עדיין מאפשרת לבעל החיים לנשום. אחיזת עורף (scruff) בחולדה מבוצעת בדרך כלל בשתי ידיים. ראשית, הוציאו את החולדה מהכלוב והניחו אותה על משטח מחספר.
בשלב הבא, אחזו את החולדה בזנבה ביד הלא-דומיננטית ומשכו. בעודכם מחזיקים את הזנב בחוזקה ביד אחת ומושכים בעדינות לאחור, התקרבו לעורף החולדה מהחלק האחורי בעזרת היד השנייה. הפילו לחץ עדין על גבה של החולדה תוך כדי תנועה כלפי מעלה לכיוון השכמות.
ולבסוף, אחיזה של העורף בין האצבעות לכף היד. חולקים עשויים להשמיע קולות כאשר הם מורחקים בצורה זו. בעת שימוש באחיזה מעל הכתף, אחזו בחולק בזנארו בעזרת היד הדומיננטית ומשכו אותו בעדינות לאחור.
בשלב הבא, הניחו את היד הלא-דומיננטית על גבו של החולדה תוך התקרבות מאחור. אחזו בחולדה מסביב לבית החזה באמצעות האצבע הטבעתית, הזרת והאגודל. ראש החולדה צריך להימצא בין האצבע המורה לאצבע האמה.
שיטת ריסון נוספת היא אחיזת מתחת לכתפיים. אחוזו בזנב באמצעות היד הדומיננטית כפי שנראה קודם לכן, והניחו את היד הלא-דומיננטית על גבו של החולדה תוך התקרבות מאחור. לאחר מכן, אחוזו את החולדה סביב בית החזה, ממש מתחת לשכמות.
יש לדחוף בעדינות את זרועותיו הקדמיות של החולדה כלפי מעלה באמצעות האגודל והאצבע המורה. על הזרועות הקדמיות להישב aquellas מתחת לסנטרה של החולדה, כדי למנוע ממנה לנשוך. ניתן להחזיק את החולדה באופן זה ביד אחת, בתנאי שגופה מיוצב כנגד המטפל.
ניתן להשתמש גם בחלק פלסטיק דק וגמיש בצורת קונוס, הנקרא decapicone, לצורך ריסון. דחפו את בעל החיים קדימה עד שאפו האף בולט מהחור שבקצה ה-decapicone, ואז החזיקו את השק סגור סביב הזנב או השתמשו בגומייה או בחוט תיל לסגירה כדי לקבע את בעל החיים במקומו. לאחר הריסון, ניתן להעביר זריקות דרך החומר הפלסטי; מכל פלסטיק קשיח הוא שימושי כאשר נדרשת גישה לזנב.
הכניסו את החולדה כפי שהנחה יצרן המכשיר. בסוג זה של מרסן, מושכים בעדינות את החולדה לאחור אל תוך המרסן באמצעות הזנב. הניחו את הסגירה בחלקו הקדמי של המכשיר וכוונו אותה כדי להגביל את תנועות בעל החיים.
אם נראה כי בעלי החיים נסערים, ניתן להשתמש בריסון באמצעות מגבת; כאשר מניחים אותה על בעל החיים, החשיכה והריסון העדין שמספקת המגבת יכולים להרגיע חולדה תוקפנית. הניחו את המגבת בעדינות על החולדה ולאחר מכן אחזו בחולדה בזהירות מסביב לגופה. עטפו את החולדה במגבת, תוך הקפדה לא לחסום את אפה של החולדה.
הזיזו את המגבת כך שחלק הגוף המיועד להזרקה יהיה חשוף. לפני ביצוע כל אחת מטכניקות ההזרקה הבאות, מומלץ להתאמן על תפעול המזרק. באופן אידיאלי, יד אחת תתפעל את המזרק בעוד השנייה תקיים את בעל החיים; מומלץ להחדיר את המחטים לגוף בעל החיים כאשר הפיה פונה כלפי מעלה, במיוחד בהזרקות תוך-ורידיות.
מחטים בעלות קוטר דק נישמות בקלות בעת החדרתן לפקקי בקבוקונים. השתמשו במחט בעלת קוטר רחב יותר לשאיבת החומרים, ולאחר מכן החליפו אותה במחט בעלת קוטר קטן יותר לצורך ההזרקה. מתן תרופות דרך האף משמש עבור סוגים מסוימים של גורמים זיהומיים במחקרי אלרגיה ואסמה, ובחלק מהמחקרים העוסקים בריאות.
מתן תרופות דרך האף אינו דורש הרדמה וניתוח, בניגוד להחדרה תוך-קשקשית (intra tracheal installation). לצורך מתן תרופות דרך האף, יש לרסן את בעל החיים כפי שתואר קודם לכן; בעזרת מזרק או פיפטה, הניחו כמות קטנה של החומר המיועד לשאיפה בנחיר של בעל החיים. המתינו עד שהחומר ייספג בתוך הנחירים וחזרו על הפעולה במידת הצורך.
תרכובות מוחדרות תוך-שרירית אם הן דורשות ספיגה מהירה וניתנות להחדרה בנפחים קטנים מאוד. ריסון להזרקות תוך-שריריות עשוי לדרוש שני אנשים, כיוון שרגל אחורית אחת חייבת להיות חופשית ומיוצבת לצורך ההזרקה. הכניסו את המחט בניצב לעור מעל שריר ה-quadriceps או מעל מסת השריר הצידית של הירך של בעל החיים.
היו זהירים שלא להזריק למסת השריר האחורית, שכן קיימת אפשרות לפגוע בעצב הסקיאטי (העצב המדשן). הזרקה תוך-בטנית נבחרת כאשר יש להחדיר נפח גדול של תרכובת, והיא מקובלת עבור קצב הספיגה, כדי לדמות את זו של מתן דרך הפה.
לביצוע הזרקה תוך-peritoneale, יש לקבע את בעל החיים ולהפנות את קצה אפו כלפי הרצפה. כדי לחשוף את הבטן, אתר את קו האמצע של בעל החיים וחלק את הבטן באופן מנטלי לרבעים.
בחרו אתר הזרקה ברביעים התחתונים, ובמיוחד ברביע הימני התחתון של בעל החיים; השתמשו במזרק ובמחט בגודל מתאים כדי להזריק את החומר לבעל החיים. מתן תת-עורי של חומר משמש כאשר רצויה ספיגה איטית.
לעכברים וחולדות יש כמויות גדולות של עור רפוי, ולכן ניתן להזריק תתי-עורית נפחים גדולים יחסית בהשוואה לבני אדם. להזרקות תת-עוריות, רסנו את בעל החיים בריסון רפוי כפי שהודגם בעבר. תפסו את העור ומשכו אותו בעדינות כלפי מעלה.
ליצירת "אוהל", השתמשו במזרק ובמחט בגודל מתאים, הכניסו את המחט בזווית של 30 עד 45 מעלות אל תוך העור המורם והזריקו את החומר. נפיחות קטנה מתחת לעור מעידה על הזרקה מוצלחת. אם יש צורך בטיפול שגרתי בבעלי החיים לאחר הזרקה תת-עורית, אין להשתמש באחיזת עור העורף (scruff).
במקום זאת, השתמשו בעור באזור הגב התחתון (dorsal rump). אם בעלי החיים אמורים לקבל מספר הזרקות תת-עוריות, יש להחליף את אתרי ההזרקה. ריסון בעלי חיים במהלך מתן תרופה תוך-עורי עשוי להיות קשה ועלול לדרוש שימוש בסדציה כימית. אם נעשה שימוש בחומר אלחוש, ודאו כי הוא אינו מפריע למטרות המחקר.
בעת ביצוע הזרקה תוך-עורית, ראשית, הסירו שיער מאתר ההזרקה כך שהעור יהיה גלוי בבירור בנקודת ההזרקה. הכניסו מחט בגודל מתאים אל העור בזווית של 15 עד 30 מעלות. אין להחדיר את המחט עמוק מדי.
אם ההזרקה בוצעה נכון, היא אמורה להיתקל בהתנגדות. במידה וההזרקה הצליחה, תופיע שלפוחית קטנה, שצבעה בהיר יותר מהעור שסביבה. הפעל לחץ עדין כדי למנוע זרימה חוזרת של החומר.
מתן תוך-כלי (Intravascular administration) משמש עבור מגוון רחב של תרכובות והוא המסלול המומלץ כאשר ניתן לנסח את התרכובת באופן מתאים ומעוניינים בהשפעה מהירה מאוד. לצורך הזרקה תוך-כלית לווריד הזנב הלטראלי, יש לקבע את בעל החיים במכסיח ראש (decap cone) או במקבע פלסטיק למכרסמים. כפי שהודגם בעבר, החזקו את זנב בעל החיים בקצהו באמצעות היד הלא-דומיננטית כדי ליישר ולסובב אותו. סובבו ברבע סיבוב כדי למקם את ורידי הזנב בצד הגבי (dorsally).
זהו את אחד משני ורידי הזנב הצדיים לצורך ההזרקה, תוך הימנעות מעורק הזנב הבטני. התקרב לחלק המרוחק של הזנב עם המחט בזווית של 15 עד 20 מעלות והזרק את החומר. הזרקה מוצלחת תתבטא בכך שהחומר ייכנס לווריד ללא התנגדות, ובשינוי צבע של וריד הזנב להבהרה למשך משך ההזרקה.
מיקום ההזרקה באופן דיסטלי יותר משמר חלק לא פגוע של הווריד שניתן להשתמש בו אם הניסיון הראשון לא צלח. מתן תוך-קיבתי או הזנה פומית (oral gavage) מבוצעים רק בבעלי חיים ערים המוחזקים בריסון, כיוון שהרדמה או סדציה מגבירות את הסיכון לשאיפה. תרכובות שנבדקות בטיחותן למתן פומי בבני אדם ניתנות לעיתים קרובות באופן זה. התחילו בבחירת מחט להזנה פומית בגודל מתאים.
האורך נקבע על ידי החזקת בעל החיים המרותק במצב זקוף ומדידה מפינת הפה. קצה הכדור של מחט ההאכלה צריך להגיע לצלע האחרונה של בעל החיים; יש לרתק את בעל החיים כך שראשו וגופו יהיו בקו אנכי ישר.
פעולה זו מיישרת את הוושט, ובכך מאפשרת מעבר קל יותר של מחט ההזנה. הכניסו את קצה הכדור של המחט לתוך פיו של בעל החיים, מעל הלשון. ברגע שהמחט במקומה, העלו את המחט והמזרק תוך לחיצה עדינה נגד החך, כך שאפו של בעל החיים פונה כלפי מעלה.
ייתכן שיהיה צורך להסיט מעט את כיוון המחט בעת מעברה בחלק האחורי של הגרון. כל מתח המורגש על המחט מעיד על הצורך להתאים את המיקום; יש להמשיך להחדיר את המחט עד להגעה למרחק שנקבע מראש. המחט אמורה לעבור בקלות והבעל חיים לא אמור להחניק או להנשף; לאחר מכן יש להחדיר את החומר.
אם מורגשת התנגדות או אם בעל החיים מנשף, נחנק או הופך לכחול, יש להפסיק מיד ולהוציא את המחט. לאחר השליטה בטכניקות אלו, תוכלו להעניק מנות בבטחה הן לחולדות והן לעכברים ולריסן אותם ביעילות. בעת ביצוע פרוצדורות אלו, חשוב לזכור כי ריסון נכון של בעל החיים הופך את הפרוצדורה לבטוחה הן עבור בעל החיים והן עבור המטפל.
אל תשכחו כי עבודה עם בעלי חיים במדע היא פריבילגיה ואחריות. בחירת שיטת הריסון הנכונה ונתיבי המתן המתאימים מהווה הן מדע נכון והן רווחה נאותה.
מאמר זה מספק טכניקות חיוניות לטיפול בטוח ולריסון של מכרסמי מעבדה, ובמיוחד עכברים וחולדות. המאמר מדגיש את חשיבותן של פרקטיקות הומניות במתן תרכובות לבעלי חיים אלו.
טיפול נכון בבעלי חיים ומתן תרכובות הם הבסיס למחקרים אמינים in vivo במחקר פרה-קליני. שליטה בטכניקות אלו מפחיתה שונות, תומכת ברווחת בעלי החיים ומשפרת את השחזוריות של הנתונים לאורך תהליכי הגילוי.
טכניקות אלו ישימות משלבי הגילוי המוקדמים ועד לפיתוח פרה-קליני, ותומכות בבחינת היפותזות, בסריקת תרכובות ובהערכת בטיחות.