Name: Cremaster עכבר הכנה שריר עבור הדמיה של Intravital microcirculation (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: למדו הכנת שריר הקרמסטר בעכברים לצפייה במיקרו-הדמיה תוך-חייתית של מערכת הדם הקטנה. שיטה זו מאפשרת חקר זרימת דם ואספקת חמצן ברמת התא בדגמים של בריאות ומחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר במעבדה של המחברים הוא נתמך על ידי המכון הלאומי לבריאות מענקים R37-HL041026, R01-R01 HL086483 ו-HL056786 (SSS) ועל ידי F32-HL097463 ו-T32 AR048523 (PB) משירות ארצות הברית לבריאות הציבור.

1. עכבר הלוח, הדום שרירים, טריז הגוף פתרון superfusion <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר הלוח: לוח פרספקס שקוף מלבני (6 "רחב X 8" X ארוך 3 / 16 "עבה) עשוי להתאים בשלב של המיקרוסקופ." הלוח העכבר "הוא שם את העכבר הרדים מאובטח במהלך הכנת כירורגית של השריר cremaster. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדום שרירים: הדום שקוף גומי silastic מוכן מ 184 Sylgard, אשר מעורבת בהתאם להוראות ° S היצרן. עובש נוח הוא 15 x 50 מ"מ עובי מ"מ קוטר קוטר צלחת פטרי הפנויה. הבלוק Sylgard נחתך לצורה הרצויה בסכין גילוח (ראה תרשים 1C).. שכבה דקה של דבק סיליקון אטום ברור משמש כדי לאבטח את גוש Sylgard לעלות על העכבר. עצות שימושיות: לאחר מזיגת Sylgard לתוך צלחת פטרי, degassing בתא ואקום שעה מסיר בועות אוויר ומשפר את בהירות. בעקבות degassing, ריפוי הזמן Sylgard מקוצר על ידי הנחת צלחת בתנור מעבדה ב 50 ° C למשך מספר שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טריז גוף חימום פלטפורמה: טריז (2 "x 4" x 15 °) ממוקם מתחת העכבר נגד הכן מטה את גופו קדימה המאפשרת הארכת שרירים cremaster על הכן ממקור שלה. שילוב פלטפורמת אלומיניום על משטח מספק מוליך חום. הפלטפורמה מחומם על ידי נגדים מחוברים לספק מתח DC (איור 1A). כיול הטמפרטורה פלטפורמה ~ 40 ° C שומר על טמפרטורת הושט ב ~ 37 ° C. אחרת, חום קורן מן המנורה משמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סיכות. כדי להבטיח את השריר cremaster על הכן, סיכות מוכנים מ 0.15 מ"מ סיכות חרקים שהיו כפופות לתוך צורה "L". </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון מלח פיזיולוגיים (PSS). ההכנות superfused (שלחין) ברציפות עם ביקרבונט שנאגרו PSS שהוכנו ultrapure (18.2 MΩ) H 2 O. פתרונות במלאי מוכנים בריכוז 20X עבודה סופית לעקר דרך פילטר 0.2 מיקרומטר. פתרונות במלאי נותרו טוב במשך כמה שבועות, כאשר מאוחסנים 4 ° C. הכנת מלחים בנפרד ביקרבונט ו לערבב אותם עם דילול ביום הניסוי מונעת משקעים של סידן ביקרבונט. הפתרון מלח המניות מורכב (ב mmol / L): 2638 NaCl, KCl 94, 40 MgS0 4, 23.4 CaCl 2. ביקרבונט המניות הוא 360 NaHCO 3. ביום של ניסוי, פתרונות בהתאמה מובאים נפח סופי (בדרך כלל 2 L לניסוי נתון) בבקבוק volumetric והניח באמבט מים ~ 37 ° C. Equilibrating PSS עם 5% CO 2 / 95% N 2 עבור ~ 15 דקות באמצעות disperser גז מתאים את ה-pH ל ~ 7.4 ומונעת משקעים. PSS הוא מבעבע ברציפות עם 5% CO 2 / 95% N 2 במהלך הניסויים. ההרכב הסופי פתרון עבודה (ב mmol / L) הוא: 132 NaCl, KCl 4.7, 1.2 MgS0 4, 2 CaCl 2, 18 NaHCO 3. </li></ol> 2. הרדמה לקראת ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות אישור טיפוח בעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש, עכברים זכרים לפחות 12 שבועות משמשים. העכבר הוא הרדים עם נתרן pentobarbital (60 מ"ג / ק"ג) באמצעות הזרקה (IP) intraperitoneal. צינור הרחקה מוכיח שימושי להבטחת עכבר במהלך הזריקה הראשונית. במהלך ניתוחים ופרוטוקולים ניסיוני, הרדמה מתוחזק על ידי תוספי מזון (10-20% של הזרקת הראשוני, ip) לפי הצורך (כל 30-60 דקות, שמסומן על ידי תגובת נסיגה הבוהן או קמצוץ הזנב). טיפ: דילול pentobarbital 10 מ"ג / מ"ל ​​סליין סטרילי לפני ההזרקה מקטין את האפשרות של מנת יתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה פשרות לוויסות טמפרטורת כך את העכבר חייב להישמר חם מיד לאחר הזריקה הראשונה. הצבת העכבר במנשא מתכת (סל אלומיניום מאוורר) על גבי צלחת חימום (מכויל ~ 37 ° C) עובד היטב. לחלופין, מנורה חום ניתן להשתמש בטיפול כדי למקם אותו במרחק מתאים מן העכבר. העכבר צריך להיות במעקב כל 5-10 דקות, עד רמה מתאימה של הרדמה מושגת (חוסר נסיגה הבוהן או קמצוץ הזנב). המנה הנוספת עשויה להידרש לאחר 15-20 דקות. עדיף להיות סבלניים להתקדם בזהירות, כדי למנוע מינון יתר, במיוחד עם בעלי חיים או מהשמנת יתר בגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השיער יוסר הבטן התחתונה, הגב התחתון, שק האשכים ואת הרגליים בקפידה על ידי גילוח לאזורים בהתאמה. תשומת לב מיוחדת יש לנקוט כדי למנוע טראומה שק האשכים ואת האשכים, אשר אחרת לפגוע בשרירים cremaster. הסרת שיער פזור עם ספוגית אלכוהול טריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם השלפוחית ​​מלאה זה ירגיש כמו ענבים קטן דרך דופן הבטן. לרוקן את שלפוחית ​​השתן באמצעות לחץ עדין על מנת למנוע את העכבר של משתין על הכנת cremaster במהלך הניסויים. Kimwipe הוא ספוג האפקט הקולקטיביתt השתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכבר על גבו, שוכב על טריז עם הרגליים בפישוק על הדום. תפר משי (4-0 או 5-0) קשור כל רגל מספקת לקשור להבטחת עכבר עם המפשעה שלה נגד הכן. חתיכת סרט להציב ברפיון על החזה מאובטח טריז שומר על תנוחת הגוף הכולל. הניתוחים מבוצעים תוך צפייה דרך stereomicroscope באמצעות מספריים microdissection ו מלקחיים זווית. </li></ol> 3. הכנה כירורגי של השריר cremaster פתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פינים ממוקם דרך הקודקוד של שק האשכים (או את הצד השמאלי או מימין) מאובטחת הכן למקום מתח על העור. Superfusion עם PSS (34-35 ° C) הוא יזם מעל השדה כירורגית ומתוחזק לאורך לנתיחה כדי לשמור על רקמת חשוף חמה ולחה. הפתיל (עשוי Kimwipe) ממוצבת עם קצה אחד ליד שק האשכים לבין הבא אחרים לקו ואקום מסיר את PSS בשפכים. טיפת דבק איטום סיליקון ללוח הפרספקס לחלוטין המקיפה את טריז ו הדום משמש "החפיר" לאסוף כל PSS שאינו aspirated, משמש אמצעי זהירות יעיל כדי למנוע דליפה PSS על המיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבצעים חתך לאורך המשטח הגחון של שק האשכים. אם האשך כבר חזר בו על ידי השריר cremaster לתוך חלל הבטן, לחץ עדין על הבטן התחתונה מכוון את האשך לתוך שק. פני השטח של שריר cremaster שמעל האשך יש לזהות בשלב זה. רקמת החיבור בין העור לבין השריר האשכים cremaster מוסרת בזהירות כדי לשחרר את השרירים cremaster מן הרקמה הסובבת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עור האשכים הוא חזר בו בעדינות מאחורי קצה פרוקסימלי של הכן ומאובטח בכל צד עם סיכה. פני השטח החיצוני של המשטח שריר cremaster מנוקה אז של רקמת חיבור. Superfusion רציף במהלך הידרט לנתיחה רקמת החיבור, בהנחיית ניראות ההסרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סיכה דרך הקודקוד של השריר cremaster משמש מקום אותו תחת מתח האורך. חתך אורכי נעשית באמצעות משטח הגחון של שריר בזהירות רבה לקחת כדי למזער הפרעה באספקת הדם. זרימת הדם דינמיקה ליד בפריפריה של הכנת משתנים על ידי זה 14 נזק לרקמות. לכן, כדי למזער את אלה משפיע על איסוף הנתונים, כלי דם בסמוך למרכז הכנת משמשים הדמיה מחקרים פיזיולוגיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השריר cremaster מחובר באמצעות רצועה דקה כדי יותרת האשך מתחת האשך. המשקף את האשך לצד אחד חושפת רצועה זו, אשר מופרדים בקפידה יותרת האשך. קרוב לשיא של השריר cremaster הוא עורק וריד קטן שבו לחבר אותו יותרת האשך. Occluding אלה כלי בין מלקחיים ופושק אותם ממזער הדימום. האשכים, יותרת האשך, האשכים עורק וריד הם ligated proximally (4-0 או 5-0 תפר משי), ניתק וזנוח (orchiectomy) יחד עם כרית השומן הקשורים מפשעתי. לחלופין, האשך יכול להיות דחף בעדינות בחזרה לתוך חלל הבטן ולהחזיק עם פיסת צמר גפן או Kimwipe. Orchiectomy משמש כדי למנוע טראומה ניתן הרקמה כאשר דוחפים את האשכים חזרה לתוך חלל הבטן. לא מצאנו הבדלים בולטים באיכות הכנת microcirculation cremaster (ראה סעיף 3.8) או באמצעות הליך 7,15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשטח החיצוני של השריר cremaster מנוקה של רקמת חיבור הנותרים ולאחר מכן להפיץ רדיאלית על פני השטח של הכן. הקצוות מובטחות עם סיכות (ראה סעיף 1.4) ב 5-6 מקומות כדי ליצור גיליון שטוח של שריר מפוספס microcirculation ללא פגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה השלימה מועבר בשלב של מיקרוסקופ intravital, superfused ברציפות (3-5 מ"ל / דקה, 34 ° C) equilibrated במשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Integrity של הכנת cremaster מוערך על פי מספר קריטריונים. הטון ספונטנית וזומוטורים עם טראומה כירורגית מינימלית מסומן על ידי זרימה מהירה של arterioles וחוסר leukocytes חסיד ב venules. המדד הרגיש ביותר של הכנה תגובה היא התכווצות של arterioles להעלאת פתרון superfusion תוכן חמצן למשך 5-10 דקות. הדבר נעשה על ידי equilibrating אותו עם 21% O 2 (לעומת 5% O 2, ראה סעיף 1.5; כל עם 5% CO 2, איזון N 2). נוכחות של לויקוציטים ב arterioles, העדר של כדוריות דם אדומות זורם דרך הנימים, ו / או leukocytes צבירת venules ו לרקמות סימנים של נזק לרקמות ודלקת. </li></ol> 4. הדמיה של Intravital microcirculation השריר cremaster <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Intravital הדמיה מבוצע על מיקרוסקופ מותאם אישית המבוסס על פלטפורמה MVX10 אולימפוס זום סטריאו. MVX10 מיקרוסקופ הגוףהוא רכוב על היברידית MVX10 עמדה מצויד שקוף (מנורת הלוגן) הדמיה (קוהלר) brightfield עם עלית תאורה (מנורת כספית) עבור דימות פלואורסצנטי. שימוש עלית תאורה, GCaMP2 הוא מתרגש בכל ננומטר 472/30 עם פליטת שנאספו ננומטר 520/35. תמונות נרכשים באמצעות PLAPO MV 2XC העדשה (הצמצם המספרי = 0.50; אולימפוס) באמצעות XR/Mega-10 התעצמה מצלמה דיגיטלית (סטנפורד Photonics, Inc, SPI) דרך פייפר בקרת תוכנה (SPI) במחשב האישי. עם מערכת זו, בתחום הנצפה של תצוגה (FOV) יכולים להיות מגוונים מ 553 מיקרומטר X 442 מיקרומטר עד 22 מ"מ X 18 מ"מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם השלמת הניסויים הדמיה intravital, העכבר הוא הרדים מורדמים עם מנת יתר של pentobarbital ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li></ol> 5. נציג תוצאות <img src="/files/ftp_upload/2874/2874fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> 1. איור עכבר הלוח הדמיה intravital הכנה העכבר cremaster. א) טריז גוף עם פלטפורמת אלומיניום (מבודד עם פלסטיק צהוב) צפו מלמטה. נגדים חימום מאובטח התחתון של הפלטפורמה לספק חום שנערך. ב) חימום נשענת על פלטפורמת טריז מפלסטיק. ג) טריז הגוף מונח על לוח פרספקס לניתוח ולהעביר לאחר השלב של המיקרוסקופ intravital. הדום Sylgard מסומן בחץ אדום. טיפת סיליקון אטום המקיפה את כל ההכנות כדי להכיל כל פתרון עלול לדלוף במהלך ההליך intravital, ומונע ממנו מטפטף על המיקרוסקופ. <img src="/files/ftp_upload/2874/2874fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> 2. איור MacroZoom אישית מיקרוסקופ עבור widefield הדמיה. א) MVX10 הגוף מיקרוסקופ (אולימפוס) עם מצלמה ICCD XR/Mega-10 (סטנפורד Photonics) רכוב על יציאת trinocular. ב) תקריב נוף של הגוף מיקרוסקופ. (א) זום הביקורת (0.63 ל 6.3X), (ב) גלגל מסנן: (ג) תמונה מכפיל (NA = 0.50 עם הגדלה אופטי 25X). ג) Substage הקבל עבור תאורה (קוהלר) brightfield (Condenser NA = 0.55, מרחק עבודה = 27 מ"מ). <img src="/files/ftp_upload/2874/2874fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> איור 3. הושלם הכנה עכבר cremaster. עכבר הרדים בעמדה פרקדן על משטח פלסטיק מצופה אלומיניום חמים (צהוב). תנוחת הגוף מאובטח באמצעות קלטת. השריר cremaster מתפשטת רדיאלית על כן גומי שקוף silastic והצמיד בקצוות. פתרון Superfusion הוא הציג בסוף הפרוקסימלי דרך dripper פלסטיק (חץ לבן). קו ריק (לבן ראש חץ) מסיר את הפתרון באמצעות פתילה Kimwipe. שני micropipettes מוצגים ממוצבת עם טיפים שלהם ברקמות. אלקטרודה הפניה (חוט הכסף) מאובטח בקצה התחתון של השריר cremaster. <img src="/files/ftp_upload/2874/2874fig4.jpg" alt="איור 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 4"> איור 4. הממחישות את טווח הגדלה המאפשר הדמיה רשתות arteriolar להביע GCaMP2 ב האנדותל. א) פלורסנט ו-B) התמונה נלקחה ב brightfield הגדלה אופטי של 3.2X עבור ההגדלה בסך הכל = 42X על צג וידאו. [שדה הראייה (FOV) = 4,375 x 3,470 מיקרומטר]. בר סולם = 500 מיקרומטר. עבודה בהגדלה זה מאפשר השמה של micropipettes במקומות הרצויים. ג) פלורסנט ו-D) התמונה נלקחה ב brightfield הגדלה אופטי של 6.4X עבור ההגדלה הכולל = 83X (FOV = 2200 x 1759 מיקרומטר). בר סולם = 200 מיקרומטר. E) פלורסנט ו-F) התמונה נלקחה ב brightfield הגדלה אופטי של 12.6X עבור ההגדלה הכולל = 165X (FOV = 1100 x 885 מיקרומטר). בר סולם = 100 מיקרומטר. G) עם מכפיל תמונה, הגדלה אופטי = 25.2X. בר סולם = 50 מיקרומטר.

<ol><li>Majno, G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+inflammation.+1.+The+effect+of+histamine+and+serotonin+on+vascular+permeability%3A+an+electron+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biophys.+Biochem.+Cytol%22%5BJournal%5D)">Studies on inflammation. 1. The effect of histamine and serotonin on vascular permeability: an electron microscopic study.</a> J. Biophys. Biochem. Cytol. 11, 571-605 (1961).</li>
<li>Majno, G., Palade, G. E., Schoefl, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+inflammation.+II.+The+site+of+action+of+histamine+and+serotonin+along+the+vascular+tree%3A+a+topographic+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biophys.+Biochem.+Cytol%22%5BJournal%5D)">Studies on inflammation. II. The site of action of histamine and serotonin along the vascular tree: a topographic study.</a> J. Biophys. Biochem. Cytol. 11, 607-626 (1961).</li>
<li>Grant, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+Observation+of+Skeletal+Muscle+Blood+Vessels+%28Rat+Cremaster%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Direct Observation of Skeletal Muscle Blood Vessels (Rat Cremaster).</a> J. Physiol. 172, 123-137 (1964).</li>
<li>Baez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+open+cremaster+muscle+preparation+for+the+study+of+blood+vessels+by+in+vivo+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy.</a> Microvasc. Res. 5, 384-394 (1973).</li>
<li>Bohlen, H. G., Gore, R. W., Hutchins, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+microvascular+pressures+in+normal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of microvascular pressures in normal and spontaneously hypertensive rats.</a> Microvasc. Res. 13, 125-130 (1977).</li>
<li>Klitzman, B., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+hematocrit+and+red+cell+flow+in+resting+and+contracting+striated+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Microvascular hematocrit and red cell flow in resting and contracting striated muscle.</a> Am. J. Physiol. 237, 481-490 (1979).</li>
<li>Hungerford, J. E., Sessa, W. C., &amp, S. egal, S, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasomotor+control+in+arterioles+of+the+mouse+cremaster+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Vasomotor control in arterioles of the mouse cremaster muscle.</a> FASEB J. 14, 197-207 (2000).</li>
<li>Figueroa, X. F., Paul, D. L., Simon, A. M., Goodenough, D. A., Day, K. H., Damon, D. N., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+role+of+connexin40+in+the+propagation+of+electrically+activated+vasodilation+in+mouse+cremasteric+arterioles+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Central role of connexin40 in the propagation of electrically activated vasodilation in mouse cremasteric arterioles in vivo.</a> Circ. Res. 92, 793-800 (2003).</li>
<li>Wolfle, S. E., Schmidt, V. J., Hoepfl, B., Gebert, A., Alcolea, S., Gros, D., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin45+cannot+replace+the+function+of+connexin40+in+conducting+endothelium-dependent+dilations+along+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Connexin45 cannot replace the function of connexin40 in conducting endothelium-dependent dilations along arterioles.</a> Circ. Res. 101, 292-1299 (2007).</li>
<li>Milkau, M., Kohler, R., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+importance+of+the+endothelial+K%2B+channel+SK3+and+connexin40+in+arteriolar+dilations+during+skeletal+muscle+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Crucial importance of the endothelial K+ channel SK3 and connexin40 in arteriolar dilations during skeletal muscle contraction.</a> FASEB J. 24, 3572-3579 (2010).</li>
<li>Bagher, P., Duan, D., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+impaired+neurovascular+transmission+in+a+murine+model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Evidence for impaired neurovascular transmission in a murine model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> J. Appl. Physiol. 110, 601-610 (2011).</li>
<li>Tallini, Y. N., Brekke, J. F., Shui, B., Doran, R., Hwang, S. M., Nakai, J., Salama, G., Segal, S. S., Kotlikoff, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagated+endothelial+Ca2%2B+waves+and+arteriolar+dilation+in+vivo%3A+measurements+in+Cx40BAC-GCaMP2+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Propagated endothelial Ca2+ waves and arteriolar dilation in vivo: measurements in Cx40BAC-GCaMP2 transgenic mice.</a> Circ. Res. 101, 1300-1309 (2007).</li>
<li>Grant, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+denervation+on+skeletal+muscle+blood+vessels+%28rat+cremaster%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">The effects of denervation on skeletal muscle blood vessels (rat cremaster).</a> J. Anat. 100, 305-316 (1966).</li>
<li>Proctor, K. G., Busija, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+among+arteriolar%2C+regional%2C+and+whole+organ+blood+flow+in+cremaster+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Relationships among arteriolar, regional, and whole organ blood flow in cremaster muscle.</a> Am. J. Physiol. 249, H34-H41 (1985).</li>
<li>Bagher, P., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+blood+flow+in+the+microcirculation%3A+Role+of+conducted+vasodilation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of blood flow in the microcirculation: Role of conducted vasodilation.</a> Acta Physiol. , (2011).</li>
<li>Hill, M. A., Simpson, B. E., Meininger, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+cremaster+muscle+hemodynamics+due+to+disruption+of+the+deferential+feed+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Altered cremaster muscle hemodynamics due to disruption of the deferential feed vessels.</a> Microvasc. Res. 39, 349-363 (1990).</li>
</ol>

נהלים ופרוטוקולים מעורבים כל בעלי החיים אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים ועדת שימוש מאוניברסיטת מיזורי והופיעה בקנה אחד עם מדריך National Institutes of Health לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. הפקה של המאמר וידאו זה כבר ממומנים על ידי סטנפורד Photonics.

כאן אנו מתארים את הכנת שריר לפתוח cremaster בעכבר על התבוננות microcirculation in vivo. הליך זה הוא המודל לאחר הכנת &quot;פתוח&quot; cremaster שתוארה לראשונה בשנת החולדה 4. בעזרת תרגול ההליך הכירורגי כולו יכול להסתיים בתוך פחות משעה 1. הרבגוניות של הכנה זו מאפשרת מגוון רחב של מניפולציות ניסיוניים מותאם בקלות אוגרים כמו גם חולדות, המאפשר מגוון רחב של דגמים ניסיוניים להיחקר באופן דומה. הכנה מוגבל חיות זכר מדידות צריך להיעשות לכיוון מרכז הרקמה, הימנעות האזורים שנפגעו ליד הקצוות של שריר 14. ראוי גם הכיר בכך, בעוד הפצות הלחץ ואת זרימת משתנים כאשר כלי מקשרות של שריר cremaster נחתכים 16, microvessels להישאר קשוב מתאים איסוף הנתונים לשחזור. המגבלה העיקרית לדמיין את בזרימת הדם בשריר cremaster היא הצטברות של רקמת חיבור כחיות בוגרת להגדיל את שטחו, בעיקר חולדות, אלא גם אוגרים. יתר על כן, כמו בעלי חיים להשמין, הוא הופך להיות קשה יותר לשלוט הרדמה כי pentobarbital הוא lipophilic והוא יכול להיקלט ורקמת השומן. הדרך הטובה ביותר להתקדם היא על ידי כך המטופל תוך הקפדה כי טמפרטורת הגוף ° S חיה נשמר ~ 37 ° C תוך הרקמה הנחשפת הינו מושקים ברציפות עם PSS.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב או התקן </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> תגובות </th></tr><tr><td> נתרן כלוריד </td><td> דיג </td><td> S642-212 </td><td></td></tr><tr><td> אשלגן כלוריד </td><td> סיגמא </td><td> P9541 </td><td></td></tr><tr><td> מגנזיום סולפט </td><td> סיגמא </td><td> M2643 </td><td></td></tr><tr><td> סידן כלוריד </td><td> סיגמא </td><td> C1016 </td><td></td></tr><tr><td> סודיום ביקרבונט </td><td> דיג </td><td> S233 </td><td></td></tr><tr><td> נתרן נמבוטל פתרון </td><td> לונדבק </td><td> NDC 67386-501-55 </td><td> המכונה גם סודיום כמו pentobarbital </td></tr><tr><td> בקר טמפרטורה </td><td> וורנר מכשירים </td><td> TC-344B </td><td> חלופי: מתכוונן 12V DC אספקת החשמל </td></tr><tr><td> סדרה 20 פלטפורמה דוד ערכת RH-2 </td><td> וורנר מכשירים </td><td> 64-0274 </td><td> דורש שהותקן צלחת אלומיניום </td></tr><tr><td> Mega-10 מצלמה </td><td> סטנפורד Photonics </td><td> XR/Mega-10 </td><td></td></tr><tr><td> MVX10 </td><td> אולימפוס </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MV PLAPO 2XC עדשה </td><td> אולימפוס </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MVX10 היברידית לעמוד </td><td> לידס </td><td> LBX-Hybrid </td><td></td></tr><tr><td> פייפר בקרת תוכנה </td><td> סטנפורד Photonics </td><td></td><td> תוכנית מצלמה מגה-10 </td></tr><tr><td> סטריאו מיקרוסקופ </td><td> ניקון </td><td> SMZ645 </td><td></td></tr><tr><td> סיליקון איטום Waterproof (Clear) </td><td> ג&#39;נרל אלקטריק </td><td> 47,970-72,643-LW5000 </td><td> אחרים איטום סיליקון ברור גם לעבוד </td></tr><tr><td> 60 x 15mm צלחת פטרי </td><td> דיג </td><td> 08-757-13A </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> Dow Corning </td><td> 184 </td><td></td></tr><tr><td> Microdissection מספריים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 15003-08 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> דומון מלקחיים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> # 5 / 45 </td><td></td></tr><tr><td> GP Millipore אקספרס PLUS ממברנה </td><td> Millipore </td><td> SCGPT05RE </td><td></td></tr><tr><td> Minutiens סיכות חרקים </td><td> אוסטרליץ </td><td> M בגודל 0.15 מ&quot;מ </td><td></td></tr><tr><td> חיות מחמד קומפקטי גוזם </td><td> וואהל קליפר קורפ </td><td> דגם 9966 </td><td> נקי לאחר כל שימוש </td></tr></tbody></table>

cremaster עכבר הכנה שריר עבור הדמיה של intravital microcirculation

The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation

בכל הגוף, שמירה על הומאוסטזיס מחייב אספקה ​​קבועה של חמצן וחומרים מזינים במקביל עם ההסרה של תוצרי חילוף החומרים. איזון זו מושגת על ידי תנועת הדם דרך microcirculation, אשר כוללת את הענפים הקטנים ביותר של אספקת הדם בכל רקמות ואיברים. סניף Arterioles מן העורקים כדי ליצור רשתות לשלוט בהפצה ובהיקף של דם מחומצן זורם לתוך ריבוי נימים קשר אינטימי עם תאים parenchymal. הנימים מספקים שטח פנים גדול לחילופי diffusional בין רקמות ותאי את אספקת הדם. Venules לאיסוף שפכים נימי להתכנס כפי שהם לחזור deoxygenated הדם לכיוון הלב. כדי לבחון את התהליכים האלה בזמן אמת דורש גישה ניסויית המאפשר הדמיה מניפולציה של microcirculation חיים. השרירים של חולדות cremaster שימש לראשונה כמודל לחקר דלקת באמצעות היסטולוגיה 1,2 ו במיקרוסקופ אלקטרונים פוסט מורטם. הראשון בדו&quot;ח vivo של השריר חשוף עכברוש שלם cremaster נחקר כלי הדם התגובות לתרופות vasoactive לידי ביטוי באמצעות האור 3. עם זאת העקמומיות של השריר וחוסר תאורה ממוקדת מוגבל את השימושיות של הכנה זו. פריצת דרך הכרוכות בפתיחת שרירים, לנתק אותו מן האשך ומפיצים אותו רדיאלית כמו סדין שטוח שקוף תחת מיקרוסקופ מתחם 4. בעוד העולם להיות הכנה חשוב ללמוד את הפיזיולוגיה של בזרימת הדם אצל חולדות 5 ו - 6 אוגרים, השריר cremaster בעכברים 7 הוכיחה שימושית במיוחד בניתוח מסלולי הסלולר המעורבים בוויסות תפקוד כלי הדם 8-11 בזמן אמת הדמיה של אינטר איתות 12. השריר cremaster נגזר השרירים הפנימיים abdominus עקיפה רוחבי כמו האשכים יורדים דרך התעלה מפשעתי 13. הוא משמש לתמיכה (ביוונית: cremaster ביריות =) ולשמור על טמפרטורת האשכים. כפי שתואר כאן, שריר cremaster מוכן כמו סדין דק שטוח עבור רזולוציה אופטית יוצאת מן הכלל. עם העכבר נשמר בטמפרטורת גוף יציב מטוס של הרדמה, הכנת הניתוח כרוך לשחרר את השריר מן הרקמה שמסביב ועל האשכים, להפיץ אותו על בסיס שקוף של גומי silastic ואבטחת הקצוות עם סיכות חרקים תוך להשקיית זה ללא הרף עם תמיסת מלח פיזיולוגית . הפרוטוקול הנוכחי מנצל העכברים הטרנסגניים GCaMP2 לבטא בתאי האנדותל arteriolar. GCaMP2 סידן הוא מקודד גנטית פלורסנט אינדיקטור 12 המולקולה. Widefield הדמיה התעצמה תשלום מצמידים את המצלמה במכשיר לאפשר במחקר vivo של איתות סידן האנדותל arteriolar.

הכנת רקמות מתואר עבור להדמיה של מניפולציה ניסויית בזרימת הדם החי. בעכברים מורדמים זכר, רזה, שרירי מאוד vascularized cremaster מוכן מיקרוסקופיה intravital ללמוד רשתות כלי הדם כולל arterioles, נימים venules. הכנה זו היא מותאמת בקלות לחולדות ואוגרים.

Cremaster עכבר הכנה שריר עבור הדמיה של Intravital microcirculation

בכל רחבי הגוף, שמירה על ההומאוסטזיס מחייבת אספקה מתמדת של חמצן וחומרי הזנה, במקביל לסילוק של תוצרי לוואי מטבוליים...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להכין את שריר הקרמסטר (cremaster muscle) כדי לחקור את המיקרוסירקולציה החיה של עכבר זכר תחת הרדמה. ניתוח זה מתחיל בחיתוך של פני השטח הוונטרליים של השכין. לאחר הגילוח, השלב הבא הוא לנקות ולהפריד את שריר הקרמסטר מהרקמות הסובבות.לאחר מכן מבצעים כריתת אשכים (orchiectomy) והרקמה נפרסת רדיאלית על פניו של מעמד שקוף. ניתן לבחון תכשיר זה באמצעות מיקרוסקופיה כדי לצלם את המיקרוסירקולציה בתוך השריר הcremaster. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות כיצד זרימת הדם ואספקת החמצן נשלטות בפועל במערכות חיות במודלים של בריאות ומחלה, ובתגובה למניפולציות ניסיוניות.ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לענות על שאלות בסיסיות במחקר רפואי קרדיווסקולרי עם דגש על המיקרוסירקולציה. בפרט, כיצד ניתן לווסת את זרימת הדם ואספקת החמצן ברמה התאית במערכת השלמה. שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי התפקוד in vivo של המיקרוסירקולציה בעכבר.ניתן להחיל זאת גם על דגמי מכרסמים אחרים, כגון המסטרים וחולדות. כדי לייצב את העכבר תחת המיקרוסקופ, יהיה צורך להכין ציוד חדש. התחילו בבניית לוח פלקסיגלאס מלבני ושקוף שיתאים לשולחן המיקרוסקופ.לאחר מכן, הכינו פדסטל שקוף מ-cigar 180 4, שנשפך לתוך צלחת פטרי. כדי להתאים את ה-15 מילימטרים, בצעו ואקום ל-sil guard שנשפך בתא ואקום למשך שעה. כדי להסיר בועות אוויר ולשפר את השקיפות, הקשיחו את ה-Degas sill guard בתנור בטמפרטורה של 50 °C למשך כשארבע שעות.לאחר הפולימריזציה, חתכו את הבסיס לצורת פנטגון עם חלק עליון מעוגל. לאחר מכן, הצמידו את בלוק הבסיס ללוח הפלקסיגלס המלבני באמצעות שכבה דקה של דבק סיליקון שקוף ועמיד למים, והמתינו לייבוש הסיליקון במהלך הלילה. לאחר מכן, בנו פלטפורמה בצורת טריז כדי למצב את העכבר מול הבסיס.ניתן להכין את פלטפורמת הטריז מפלסטיק אקרילי, וניתן להשתמש במנורת חימום כדי לשמור על הדגימה חמה. לחלופין, ניתן להרכיב אלומיניום על טריז פלסטיק. האלומיניום מחומם באמצעות גופי חימום התנגדותיים המחוברים לספק כוח DC.לבסוף, ביום הניסוי, הכינו PSS עם בופר קרבונט במים אולטרה-טהורים. ערבוב המלחים ביום הניסוי מונע שקיעה של ביקרבונטים. שמרו את ה-PSS באמבט מים בטמפרטורה של 37 °C והשילו את ה-PSS עם 5% carbon dioxide בגז חנקן למשך 15 דקות באמצעות מפזר גזים.פעולה זו מתאימה את ה-pH לכ-7.4 ומונעת שקיעה נוספת של מלחים. לאחר הרדמת עכבר בוגר, גלחו בזהירות את הפרווה מהבטן התחתונה, הגב התחתון, השקיים והרגליים. הגבירו את זהירותכם סביב השקיים והאשכים כדי למנוע פגיעה בשריר ה-cremaster שמתחתיהם.הסיר שיער בודד באמצעות תחבושת אלכוהול נקייה. בדוק אם השלפוחית מלאה. אם היא מלאה, היא תרגיש כמו ענב קטן דרך דופן הבטן; במקרה זה, רוקן אותה.הפעילו לחץ עדין והחזיקו את קצהו של נייר סופג (kim wipe) לצד הפיפיס לאיסוף השתן. כעת, מקמו את העכבר על גבו, כשהוא שוכב על פלטפורמת הטריז ורגליו עוטפות את פדסטל המגן, ולאחר מכן אחרו את העכבר כך שמפשקו יישען אל הפדסטל. כדי לשמור על התנוחה, הדביקו רצועת דבק באופן רפוי לרוחב החזה והצמידו אותה לפלטפורמה.התחילו את הניתוח על ידי קיבוע סיכה דרך קודקוד שק השפשכת אל תוך הפדסטל, כדי להפעיל מתיחה על עור השפשכת. כעת, התחילו ושמרו על סופרפוזיה של PSS מעל שטח הניתוח לאורך כל הדיסקציה. כדי להסיר את ה-PSS העודף, מקמו נייר סופג מסוג Kim wipe כשקצה אחד נמצא לצד שק השפשכת והקצה השני לצד קו הוואקום.בעזרת מספרי מיקרודיסקציה, תוך כדי החזקת העור עם פינצטה זוויתית, בצעו חתך אנכי לאורך פני השטח הגבונים של שק השכים, במידה והאשך נסוג אל תוך חלל הבטן על ידי שריר הקרמסטרה. הפעלת לחץ עדין על הבטן התחתונה תכוון את האשך אל תוך השק. כעת זהו את פני השטח של שריר הקרמסטרה המכסה את האשך, והסירו בזהירות רקמת חיבור בינו לבין עור השכים.כדי לחשוף את שריר ה-cremaster, גרבו בעדינות את עור השכין מאחורי הקצה הפרוקסימלי של המעמד והאביחו אותו מכל צד. באמצעות סיכה, נקו כעת את השטח החיצוני של השריר מרקמת חיבור. החדירו סיכה דרך קודקוד שריר ה-cremaster כדי להפעיל מתיחה ולבצע בזהירות רבה חתך אורכי דרך פניו הגבתיים, תוך ניסיון למזער פגיעה באספקה הדם.השריר הראשי של הקרם (cream master muscle) מחובר ברצועה דקה ל-EPIs. מתחת לאשכים, הסט את האשש לצד אחד. כדי לחשוף רצועה זו, יש להפרידה אותה בזהירות מה-EPIs.בסמוך לשיא של שריר ה-cremaster נמצאים עורק ווריד זוגיים קטנים המחוברים ל-epididymus. קבעו כלי דם אלו בעזרת פינצטה והפרידו ביניהם כדי למזער את הדימום. כעת בצעו orchi-ectomy, כולל את כרית השומן המפשעתית (inguinal fat pad) פרוקסימלית, וקשרו את האשך, ה-epididymus, את העורק והווריד של האשך.לאחר מכן יש לחתוך ולהסיר אותם. נקה את שריר ה-cremaster מרקמה חיבורית שנותרה, ולאחר מכן פרס אותו באופן רדיאלי על פני השטח של המעמד. קבע את הקצוות באמצעות חמישה עד שישה סיכות כדי ליצור גיליון שטוח של שריר משורטט עם מיקרו-סירקולציה תקינה.העבירו את הדגימה המוכנה לשולחנה של מיקרוסקופ intra vital, המוחזק בטמפרטורה קבועה של 34 °C, והמתינו 30 דקות להשגת שיווי משקל לפני ביצוע מניפולציות ניסיוניות או איסוף נתונים. באמצעות מיקרוסקופ מותאם עם תאורת שדה בהיר (brightfield) ותאורה אפי-פלואורסצנטית (epi illumination), נרכשו תמונות דיגיטליות של דגימת ה-cremaster תחת תאורת brightfield. השריר נצפה תחת פלואורסצנציה בהגדלות של 42x, 83x ו-165x. השריר נצפה בהגדלות של 42x, 83x, 165x ו-330x לאחר התפתחותו.טכניקה זו סללה את הדרך עבור חוקרים בתחום המיקרוסירקולציה ללמוד את המנגנונים העומדים בבסיס הבקרה של רקמות, זרימת דם, אספקת חמצן ודלקת. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לטיפל ברקמה בעדינות כדי להבטיח שהתגובתיות של המיקרווסקולריות תישמר.

the-mouse-cremaster-muscle-preparation-for-intravital-imaging

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שיטה צדדי חדש להסתכלות של microcirculation מוצג. זה נחשב מתאים תצפית ארוכת טווח, ועל בשילוב עם התערבויות ביולוגיות pharmacophysiological או המולקולרית.

במדידה Micro-vivo מחזור בשרירי השלד על ידי מיקרוסקופית תוך חיוני

מיקרוסקופיה Intravital לעקוב אחרי האירועים hemodynamic ו דלקתיות ומרחב ב microcirculation pial.

מיקרוסקופית Intravital של microcirculation המוח עכבר באמצעות חלון גולגולתי סגור

Microiontophoresis כרוכה בתנועה של יונים מן micropipette בתגובה הבדל בפוטנציאל חשמלי בין בתוך ומחוץ micropipette. מולקולות פעילות ביולוגית מועברות ובכך ביחס זרם חשמלי. אנו מדגימים microiontophoresis אצטילכולין בשיתוף עם המיקרומניפולציה ללמוד האנדותל תלויי התרחבות ב microcirculation.

Microiontophoresis ו המיקרומניפולציה עבור דימות פלואורסצנטי Intravital של microcirculation

אנו מתארים פרוטוקול של מיקרוסקופיה brightfield intravital למדידת דינמי נויטרופילים-אנדותל האינטראקציות התא במהלך לגיוס נויטרופילים בתגובה מקור chemoattractant נויטרופילים in vivo. זחילה נויטרופילים intraluminal, הגירה chemotaxis transendothelial ו ברקמת השריר cremaster העכבר הם דמיינו עם הצילום בזמן שחלף וידאו מעקב עם ImageJ.

מעקב זחילה Intraluminal נויטרופילים, הגירה Chemotaxis Transendothelial ועל רקמות על ידי מיקרוסקופית וידאו Intravital

מיקרוסקופ דיגיטלי intravital epifluorescence של venules postcapillary ב microcirculation cremasteric היא שיטה נוחה להבנה טובה של אינטראקציה...

בזמן אמת הדמיה דיגיטלית של אינטראקציה ליקוציט-אנדותל של פגיעה איסכמיה reperfusion (IRI) של השריר Cremaster עכברוש

כאן אנו מדווחים טכניקה ניסויית של מיקרוסקופיה intravital פלואורסצנטי לדמיין אינטראקציות heterotypic טסיות דם נויטרופילים על האנדותל הופעל במהלך דלקת כלי דם והיווצרות קרישים בעכברים חיים. טכנולוגיה מיקרוסקופית זה תהיה יקרה כדי לחקור את המנגנון המולקולרי של מחלת כלי דם ולבדוק סוכנים תרופתיים בתנאי pathophysiological.

הדמיה בזמן אמת של אינטראקציות heterotypic טסיות דם-נויטרופילים על האנדותל הופעל במהלך דלקת של כלי דם והיווצרות קרישים בעכברים חיים

מיקרוסקופיה Intravital של זרימת דם Cremaster העכבר מ 'מציעה ייחודית וסטנדרטיזציה גם במודל vivo לניתוח נדידת תאי גזע של מח עצם היקפי.

מיקרוסקופית Intravital של זרימת הדם בשריר העכבר Cremaster לניתוח של נדידת תאי גזע היקפי

מיקרוסקופיה Intravital היא כלי רב עוצמה המאפשר הדמיה של תהליכים ביולוגיים שונים בבעלי חיים. במאמר זה, אנו מציגים שיטה מפורטת להדמית הדינמיקה של מבני subcellular, כגון גרגרי ההפרשה, בבלוטות הרוק של עכברים חיים.

מיקרוסקופית Intravital למבני ההדמיה subcellular בעכברים חיים לבטא חלבוני פלורסנט

אנו מפרטים פרוטוקול לניטור התנהגותם של נויטרופילים ומונוציטים בוורידים מזנטריים במצב יציב ובתנאים דלקתיים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית תוך-חיונית בעכברים מורדמים.

הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת

מחקר זה מדגים את ההכנה הכירורגית של שריר החולדה להדמיה של השכבה נטולת התאים in vivo. גורמים ניכרים המשפיעים על הדיוק של מדידת רוחב השכבה נטולת התאים נדונים במחקר זה.

ויזואליזציה וכימות של שכבה חסרת התא ב arterioles של השריר עכברוש Cremaster

כאן, אנו מראים כיצד לבצע מיקרוסקופ לאחר הנימי של השריר הראשי של העכבר. בדרך כלל מיושם מודלים שונים של דלקת אלח דם, במיוחד אלה המושרה על ידי נוגדנים ו ציטוקינים, אנו להדגיש את הרלוונטיות שלה במחקר של מוסקולופאאס מעורבים חדירה מוגזמת שרירי לוקיציט.

הסתננות לאוציט של שריר Cremaster בעכברים המוערך על ידי מיקרוסקופ אינטרטל

למדו הכנת שריר הקרמסטר בעכברים לצפייה במיקרו-הדמיה תוך-חייתית של מערכת הדם הקטנה. שיטה זו מאפשרת חקר זרימת דם ואספקת חמצן ברמת התא בדגמים של בריאות ומחלה.

Cremaster עכבר הכנה שריר עבור הדמיה של Intravital microcirculation

גלה סרטונים נוספים