Name: Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 3 s
Description: חקור הדמיית פלישת תאים סרטניים בלשון עכבר באמצעות מיקרוסקופיית שני-פוטון. שיטה זו מאפשרת הערכה כמותית של חדירת הגידול ופיתוח תרופות נגד פלישה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

נתמך על ידי subproject של NIH מענק P20 RR16440 ומענק גשר בין משרד אוניברסיטת וירג&#39;יניה המערבית של מחקר וחינוך בוגר כדי ויד ס. סיוע טכני בין לופז ל-סקינר במהלך השלבים המוקדמים של פיתוח הפרויקט היא הודתה בהכרת תודה. המחברים הם גם אסיר תודה על סיוע טכני OSC19 תאים ג&#39;מאיירס ומ יונס (המחלקה לכירורגיה ראש וצוואר, MD Anderson Cancer Center, ביוסטון, טקסס), פ &#39;טרנר ק סקרסט (מערב וירג&#39;יניה אוניברסיטת המחלקה פתולוגיה בנק רקמות) לעיבוד ונהלים היסטולוגית, ר &#39;Wysolmerski (אוניברסיטת וירג&#39;יניה המערבית, המחלקה לנוירוביולוגיה אנטומיה) על הקמת LifeAct-mCherry וג&#39; בר (אוניברסיטת צפון קרוליינה) עבור וקטור pLL7.0 lentiviral. השימוש במתקן אוניברסיטת וירג&#39;יניה המערבית הדמיה מיקרוסקופית (נתמך על ידי NIH מענק P20 RR16440 ואת באב מרי רנדולף Cancer Center) מעבדה שאינו ליניארי שלה מיקרוסקופיה אופטית (NLOM, נתמך על ידי פעולה משותפת בין וירג&#39;יניה המערבית המרכז האוניברסיטאי למדעי המוח ואת וירג&#39;יניה המערבית אוניברסיטת המחלקה לפיסיקה / מערב וירג&#39;יניה הננו יוזמת) היא גם הודתה בהכרת תודה. NLOM הוא נתמך בחלקו על ידי מענק NIH P30 RR031155 למרכז Neuroscience.

<ol><li>Sano, D., Myers, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+models+of+head+and+neck+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck+Oncol%22%5BJournal%5D)">Xenograft models of head and neck cancers.</a> Head Neck Oncol. 1, 32-32 (2009).</li>
<li>Kim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cancer+in+the+head+and+neck+region%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Otorhinolaryngol%22%5BJournal%5D)">Animal models of cancer in the head and neck region.</a> Clin Exp Otorhinolaryngol. 2, 55-60 (2009).</li>
<li>Myers, J. N., Holsinger, F. C., Jasser, S. A., Bekele, B. N., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+nude+mouse+model+of+oral+tongue+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An orthotopic nude mouse model of oral tongue squamous cell carcinoma.</a> Clin Cancer Res. 8, 293-298 (2002).</li>
<li>Sano, D., Myers, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastasis+of+squamous+cell+carcinoma+of+the+oral+tongue%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Metastasis of squamous cell carcinoma of the oral tongue.</a> Cancer Metastasis Rev. 26, 645-662 (2007).</li>
<li>Sano, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+combination+anti-endothelial+growth+factor+receptor+and+anti-vascular+endothelial+growth+factor+receptor+2+targeted+therapy+on+lymph+node+metastasis%3A+a+study+in+an+orthotopic+nude+mouse+model+of+squamous+cell+carcinoma+of+the+oral+tongue%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">The effect of combination anti-endothelial growth factor receptor and anti-vascular endothelial growth factor receptor 2 targeted therapy on lymph node metastasis: a study in an orthotopic nude mouse model of squamous cell carcinoma of the oral tongue.</a> Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 135, 411-420 (2009).</li>
<li>Kupferman, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrkB+induces+EMT+and+has+a+key+role+in+invasion+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">TrkB induces EMT and has a key role in invasion of head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oncogene. 29, 2047-2059 (2010).</li>
<li>Ammer, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saracatinib+Impairs+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma+Invasion+by+Disrupting+Invadopodia+Function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Sci+Ther%22%5BJournal%5D)">Saracatinib Impairs Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Invasion by Disrupting Invadopodia Function.</a> J Cancer Sci Ther. 1, 52-61 (2009).</li>
<li>Rosenthal, E. L., Kulbersh, B. D., King, T., Chaudhuri, T. R., Zinn, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+fluorescent+labeled+anti-epidermal+growth+factor+receptor+antibody+to+image+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Use of fluorescent labeled anti-epidermal growth factor receptor antibody to image head and neck squamous cell carcinoma xenografts.</a> Mol Cancer Ther. 6, 1230-1238 (2007).</li>
<li>Gleysteen, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+labeled+anti-EGFR+antibody+for+identification+of+regional+and+distant+metastasis+in+a+preclinical+xenograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck%22%5BJournal%5D)">Fluorescent labeled anti-EGFR antibody for identification of regional and distant metastasis in a preclinical xenograft model.</a> Head Neck. 30, 782-789 (2008).</li>
<li>Bhirde, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+killing+of+cancer+cells+in+vivo+and+in+vitro+with+EGF-directed+carbon+nanotube-based+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Targeted killing of cancer cells in vivo and in vitro with EGF-directed carbon nanotube-based drug delivery.</a> ACS Nano. 3, 307-316 (2009).</li>
</ol>

מודלים העכבר orthotopic הוכיחו שימושי לחקר היבטים רבים של סרטן הראש והצוואר 1,2. יש לנו שילוב מערכת orthotopic מבוססת היטב של הסקוטי 3 עם הדמיה מיקרוסקופית שני הפוטונים של תאים mCherry שכותרתו כמערכת ללמוד את האירועים הראשונים של הראש והצוואר הפלישה גידול התא. בהליך זה, יש לציין כי תאים יכול לדלוף מאתר ההזרקה הגידול, בעיקר בעכברים שישה שבועות או פחות בשל גודל הלשון מספקת. אנו משתמשים עכברים מבוגרים, כדי למנוע בעיה זו. גודל הלשון גדול עם עכברים מבוגרים גם מסייע למניעת קרע של עורק לשונית דימום יתר מן הלשון. לקחת הגידול הוא משפר באופן דרמטי כאשר הלשון מתנפחת באתר ההזרקה הראשוני. שוככת זה נפיחות בתוך 1-2 שעות כמו הנוזל המוזרק נספג. הגידול מופיע מאליו 1-2 שבועות זריקה הודעה עם מספר הנייד הצביע על מוזרק כמו בליטה לבנה קטנה על פני הלשון. כמו כן, אנו מציינים כי על המטרה 40X שימוש במחקרים שלנו שהוצגו כאן, אנחנו לא יכולים להבדיל תאים סרטניים בודדים אך מזדהים IGS כאשכולות תא פולשנית כי לשחזר את מצב טיפוסי של הפלישה HNSCC. עד כה במודל זה נעשה שימוש נרחב לבדיקת התפקיד של מולקולות ספציפיות, כמו גם מספר תרופות אנטי הגידול על הצמיחה Scot פלישה, עם יעילות נמדדת גרורות הצומת לימפה בצוואר הרחם לנטר באמצעות IHC או bioluminescent שיטות 4-7. גידולים שנוצרו לידי ביטוי במערכת זו קרוב לפני השטח לשון (איור 7), המאפשר את היישום של מיקרוסקופיה שני הפוטונים גידולים התמונה כולה באתרו כמו רב הסלולר אשכולות פולשנית. ההליך יכול גם להיות מנוצל כדי להמחיש הפלישה הגידול עם רזולוציה הסלולר. מיקרוסקופיה דו פוטון נוצל בעבר ללמוד טיפולים ניסיוניים עבור סרטן הראש והצוואר ב 8,9 ו orthotopic xenograft 8,10 מודלים. עם זאת, ישנם שני הבדלים משמעותיים בין דוחות אלה פרוטוקול שלנו. ראשית, מחקרים אלה להשתמש בתוויות תאיים למקד / לזהות תאים סרטניים הראש והצוואר, אולי רק כדי להגביל את גילוי תאים סרטניים עם גישה נאותה במחזור הדם. הפלישה השנייה של תאים סרטניים קרוב ל האתר העיקרי משחזר סביר פעילות גרורתי מוקדם לא הוערך כפרמטר ניסיונית. פרוטוקול שלנו מספק את היכולת לכמת באופן ישיר הפלישה תאים סרטניים בכל נקודה במהלך התקדמות הגידול בלשונות העכבר. בעוד השיטה המתוארת כאן מתאר את ההליך באמצעות לשונות גזור, אנחנו נמצאים כרגע בתהליך של הסתגלות בשיטה זו כדי הפלישה הגידול התמונה עכברים חיים לשימוש בשילוב עם פליטת אור בו זמנית לפקח על הפלישה מוקדם, מעורבות קשרי לימפה מקומיות ו גרורות רחוקות אותו בעל חיים. שינויים בפרוטוקול עבור in vivo הדמיה דורשים עיצוב הבמה המתאימה מיצוב ושמירה על עכברים במהלך הדמיה, כמו גם מערכת מעשית שצריך להשקות את חלל הפה של בעכברים מורדמים במהלך ההליך הדמיה. אופטימיזציה פעם, עיבודים אלה יספקו את היכולת ללמוד את התפקיד של הפרו פולשנית מולקולות פוטנציאליות נגד פולשני לבדיקת תרכובות על הפלישה המקומית ומעורבות גרורות מרוחקות יותר אצל בעלי חיים על פני תקופות זמן ממושך.

multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

לוקו אזורי הפלישה של סרטן הראש והצוואר קשורה לסיכון גרורתי מציב אתגר קשה בעיצוב ויישום אסטרטגיות ניהול המטופל. מודלים העכבר orthotopic של סרטן הפה פותחו כדי להקל על מחקר של גורמים הפלישה להשפיע ולשמש מודל להערכת מערכת אנטי הגידול הרפוי. במערכות אלה, ויזואליזציה של תאים סרטניים המופץ בתוך רקמות חלל הפה יש בדרך כלל נערכו על ידי היסטולוגיה או קונבנציונלי או עם שיטות vivo bioluminescent. החיסרון העיקרי של שיטות אלה הוא חוסר היכולת לחזות במדויק את הטמון ולכמת תא בתחילת הפלישה הגידול הנובע האתר הראשי בשלושה ממדים. כאן אנו מתארים פרוטוקול המשלבת מודל הוקמה עבור קרצינומה של תאים קשקשיים של הלשון (סקוטי) עם הדמיה שני הפוטונים כדי לאפשר רב וקטורי להדמיה של התפשטות הגידול לשוני. OSC-19 ראש הגידול בצוואר קו התא תוכנן ביציבות לבטא את LifeAct F-אקטין פפטיד מחייב התמזגו לחלבון mCherry ניאון (LifeAct-mCherry). Fox1 נו / נו עכברים הוזרקו תאים אלה בצורה אמינה גידולים המאפשרים הלשון להיות דמיינו ידי יישום לשעבר vivo של מיקרוסקופיה שני הפוטונים. טכניקה זו מאפשרת ויזואליזציה orthotopic של מסת הגידול והמקומית פולשים לתאים לשונות נכרת ללא הפרעה של microenvironment הגידול האזורי. בנוסף, מערכת זו מאפשרת כימות של הפלישה תאים סרטניים על ידי חישוב מרחקים שפלשו להעביר תאים ממקום הגידול הראשוני. בסך הכל הליך זה מהווה מערכת מודל משופר לניתוח הגורמים שתורמים הפלישה Scot וטיפולים טיפולית המותאמת למנוע פלישה מקומית התפשטות גרורות רחוקות. שיטה זו גם יש את הפוטנציאל להיות משולב בסופו של דבר עם שיטות הדמיה אחרות בסביבה vivo.

סקירה מקיפה של טכניקות מעורב ביצירת מודל עכברי של סרטן הפה ניטור כמותי של הפלישה הגידול בתוך הלשון באמצעות מיקרוסקופ רב פוטון של תאים שכותרתו מוצג. מערכת זו יכולה לשמש פלטפורמה שימושי להערכת יעילות התרופה מולקולרית של תרכובות אנטי פולשנית.

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

פלישה ਲੋקו- bölgesialית של סרטן ראש וצוואר קשורה לסיכון גרורתי ומהווה אתגר קשה בתכנון וביישום של טיפול בחולה...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא להפיק מודל עכברי של סרטן הפה המאפשר ויזואליזציה וכימות של פלישת הגידול בלשון. דבר זה מושג תחילה על ידי יצירת תאי קרצינומה סקוואמוזית של הפה לצורך דימות בדו-פוטון באמצעות זיהום לנטיבירי של life Act M cherry וברירה קלונאלית יציבה. לאחר מכן, גידולי קסנוגרפט אורטוטופים מופקים בעכברי nude על ידי הזרקה של תאים המסומנים ב-life Act M cherry ללשונותיהם של עכברים תחת הרדמה.לאחר מכן, לשונות המכילות גידולים מדויקות באמצעות מיקרוסקופיית פוטון כפול. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות פלישה מקומית של גידול פה בתוך שריר הלשון באופן כמותי, וזאת באמצעות הדמיית פוטון כפול של רקמת לשון טרייה ושחזור תלת-ממדי מ komputer של גידולים ראשוניים וקבוצות תאים שפלו regionaly.ההשלכות של טכניקה זו חוללות התקדמות לעבר התערבות טיפולית בסרטן הפה, שכן היא מספקת מערכת מודל לניתוח חלבונים המעורבים בפלישת גידולים, וכן להערכת תרכובות פרה-קליניות באסטרטגיות טיפוליות אנטי-אינבזיביות. באופן כללי, אנשים שאינם בקיאים בטכניקה זו יתקלו בקושי, שכן הזרקת תאי הגידול ללשון והכנת הלשון למיקרוסקופיה דו-פוטונית הן דרישות תובעניות מבחינה טכנית, הדורשות מיומנות ותרגול. ויזואליזציה של שיטה זו היא קריטית, כיוון ששלבי הזרקת הגידול והמיקרוסקופיה הדו-פוטונית קשים ללמידה ודורשים מיומנות מיוחדת כדי להתחיל את התרבית.קווי תאי גידולים של ראש וצוואר אנושיים במצע מלא המורכב מ-DMEM בתוספת 10% FBS, 1% penicillin streptomycin, ו-1% חומצות אמינו שאינן חיוניות. על מנת להעביר את רצף הציפוי של LIFE Act M cherry לאתר הווקטור הלנטיבי PLL 7.0, נדרש תחילה מוטגנזה מכוונת לאתר (site directed mutagenesis) כדי להחדיר שלוש מוטציות שקטות לאתר זיהוי SBF one ב-mCherry cDNA ההורה. לאחר מכן, בצעו הגברה באמצעות PCR לרצף ה-Life Act mCherry המותאם, עם אתרי ECO R one SBF one משני צדדיו, ובצעו סב-קלון (subcloning) לתוך PLL 7.0. כדי לייצר מבנה PLL 7.0 LIFE Act M cherry, בהתאם למערכת ביטוי לנטיבית, תרבתו את קו תאי האריזה 2 9 3 T עד להגעה ל-17% עד 40% התמסרות (confluence) במצע מלא.בצע טרנספקציה לתאים באמצעות CalFoss עם הווקטורים PLL 7.0, LIFE Act M cherry, PS PACS 2 ו-P-VSV-G ביחס של 3:2:1 בהתאמה. לאחר 24 שעות, החלף את המצע במצע טרי ומלא; אסוף והחלף את המצע מדי 12 שעות למשך 72 שעות, ואחסן את המצע שנאסף בטמפרטורה של 4°C כדי להפיק שורות תאי ראש וצוואר עם ביטוי יציב של LIFE Act M cherry. סבב את המצע שנאסף במהירות של 2000 RPM למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4°C, והוסף 1 mL של המצע המזוקק המכיל את הווירוס לתאי OSC 19 או US CCC 1 למשך 12 שעות.שטפו את התאים, ולאחר מכן הוסיפו מיליליטר נוסף של וירוס לתקופה של 12 שעות נוספות. גדלו את התאים במדריך המכיל 200 milligrams per milliliter של pur mycin למשך שבועיים כדי לבחור מושבות עמידות. בצעו סריקה חזותית של המושבות השורדות כדי לזהות ביטוי של m cherry באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. בצעו trypsin eyes למושבות חיוביות בודדות באמצעות דיסקי שיבוט סטריליים של three millimeter.יש לתחזק את התאים החיוביים במדיום המכיל 200 mg/mL של purmycin עד להקפאתם מחדש, או עד לשימושם להזרקה אורתוטופית לצורך יצירת קסנוגרפט של גידול אורתוטופי של תאי גידול המבטאים M cherry trypsin life Act. לאחר מכן, יש לסבב את התרבית במ centri-fuge ולסבב מחדש כ-2.5 × 10⁴ תאים ב-50 µL של מדיום מלא. יש להעביר את תאי הגידול למזרק של 1 mL המחובר למחט במידה 27 באורך חצי אינץ'.בשלב הבא, הרדימו נקבת עכבר עירום (athymic fox) בת שמונה שבועות. השתמשו בשילוב של 80 milligrams per kilogram של ketamine ו-10 milligrams per kilogram של xylazine. ברגע שהבעל החיים מפסיק לזוז, מרחו משחת לסיכוך העיניים ובדקו את רמת התגובה באמצעות לחיצה עם הציפורן על כרית כף הרגל.שמרו את העכברים על פלטת חימום בטמפרטורה של בין 37 ל-40 °C. בעזרת פינצטה סטרילית, אחזו בעדינות בקצה הלשון ומשכו אותה החוצה מחלל הפה. מזריקו באיטיות את התאים לצד אחד של כל לשון כדי ליצור מסה בולטת במרכז הלשון.הזריקו לעכברים 2.1 מיליגרם לקילוגרם של yohi being והחזירו אותם למשטח החימום כדי לעקוב אחריהם במהלך ההתאוששות מההרדמה. הניחו את העכברים בכלובים סטריליים המכילים תזונת בצק טרנסגנית רכה. שקלו את העכברים מדי יומיים עד שלושה ימים ועקבו אחריהם באופן חזותי כדי לזהות הופעת גידולים.כדי להכין לשונות עכברים לדימות ex vivo, יש להקרין עכברים הנושאים גידולים בנקודות זמן שונות. באמצעות שאיפת פחמן דו-חמצני, הוצא את הלשונות ושטוף אותן ב-XPBS. לאחר מכן, השתמש בחוט תפירה מונופילמנט מחנות תחביבים מקומית ובמחט תפירה בגודל שמונה.הצמידו את הלשון לאחד הצדדים של קסאט (cassette) סטנדרטי להטבעת רקמות בפראפין. לאחר שהלשון קובעה, טבלו את כל מכלול הקסאט ב-one XPBS. עבדו מיד את הלשונות באמצעות מיקרוסקופיה דו-פוטונית כדי לדגמה את הלשונות במיקרוסקופיה דו-פוטונית.טבלו את קסטות הלשון בצלחת של 60 מילימטר המכילה XPBS אחד. קבעו את הצלחת במחזיק בעיצוב מותאם על זרוע קנטילבר נשלפת הממוקמת תחת העדשה של מיקרוסקופ פוטונים כפולים. מקמו עדשת אובייקטיב טבילה במים בעלת הגדלה של 40 ופתח מספרי (numerical aperture) של 0.8 ישירות על או מעל נגע גידולי גלוי.בצעו הדמיה של הלשון באמצעות מיקרוסקופיה של שני פוטונים עם לייזר טיטניום-ספיר בעוצמה של 60 milliwatts ואורך גל כניסה של 755 nanometers. כדי למקסם את אות ה-M cherry, אספו סדרת תמונות סריקת לייזר של 1 micrometer בעומקים הדרגתיים של 1 micrometer, לאורך עומק רקמה כולל שבין 15 ל-100 micrometers. בתצורה זו, ניתן לנתח גידולים בעומק רקמה של עד 1 millimeter.השתמשו ב-scan image ללכידת תמונות. Scan image מייצר פלט דו-ערוצי של דפוסי סריקה רסטרית לשליטה במראות סריקה גלוונומטריות בצירי XY, ובמקביל לוכד אות קלט של עד ארבעה ערוצים ממכפלי פוטונים (photo multiplier tubes) באמצעות כרטיס רכישת נתונים. Scan image אוסף תמונות Z stack על ידי שליטה בציר Z של העדשה, ואוסף תמונות time-lapse במצב בודד או מחזורי.שמרו את התמונות בקובץ TIF יחיד בעומק 16 ביט. השתמשו בתוכנת Amira כדי לרנדר את ערימות תמונות הגידול לתמונה תלת-ממדית אחת, על ידי פתיחת קובץ ה-TIF המכיל את סט תמונות ה-Zs stack. השתמשו בפונקציית TEX כדי להפיק רינדור תלת-ממדי.בדימוי המעובד תופיע ככל הנראה תמונה של גידול ראשוני גדול עם מספר קבוצות פולשניות מופרדות (igs) קטנות יותר. כדי למדוד את נפח הגידול, הגדירו את סף השטח של הגידול הראשוני ובכל פרוסה של ערימת התמונות תקנו והסירו את הפלואורסצנציית הרקע. חזרו על הליך קביעת הסף עבור כל קבוצה פולשנית.לאחר בחירת הגידול הראשוני וכל ה-igs, קבע את מדידת הנפח וכן את קואורדינטות ה-OID בצירי X, Y ו-Z של הגידול הראשוני. כדי לחשב את המרחקים של ה-igs מהנקודה המרכזית של הגידול, חשב את מדד הפלישה של הגידול או ti באמצעות הנוסחה ti equals N NT times VT times dt. כאשר NT שווה למספר הכולל של igs בתמונה, VT שווה לנפח הכולל של כל ה-igs ו-DT שווה למרחק הכולל שעברו כל קבוצות הפלישה ממרכז הגידול הראשוני.ניתן להפיק הדמיות תלת-ממדיות עם פירוט טופוגרפי גבוה יותר על ידי ייבוא קבצי הקצה המקוריים במונוכרום של 16 ביט אל Nikon NIS elements בתוך התוכנה. צור קובץ ND ממעטפת תמונות (image stack). לאחר מכן, כייל את המסמך באופן ידני כדי להגדיר את גודל הפיקסל עבור הדמיות באיכות גבוהה יותר.הוסיפו פרוסות נוספות במישור Z. דמות זו מציגה דוגמה לנתונים הגולמיים שנרכשו מדימוי פוטון כפול באמצעות NIS elements או מראה. ניתן להשתמש בתוכנה כדי לשחזר את הנתונים הגולמיים של גידולי לשון, המוצגים בדמות זו.לוח זה מציג דוגמה לרינדור תלת-ממדי באמצעות פונקציית ה-TEX בתוכנת Amira. כאן מוצגת דוגמה לסף (thresholding) של חתך בודד במיקרוסקופיה של שני פוטונים מתוך מחסנית התמונות, כדי לזהות קבוצות פולשניות מהגידול הראשוני, וכן את מרכז הגידול הראשוני או ה-oid. לאחר ניתוח של כל חתך שעבר סף, תוכנת Amira מכמתת את הנפח ואת המרחק שעברו כל אחת מהקבוצות הפולשניות מהמרכז (Centro).ניתן להציג נתונים אלו גרפית ולהשתמש בהם כדי לקבל את הערך המספרי של רמת הפלישה המלאה של תאי הגידול. התמונות המוצגות כאן, המיוחסות לאתר הראשוני, הן תמונות מייצגות של גידולים כפי שנראים בסימון אימונוהיסטוכימיה פתולוגי קונבנציונלי, בהשוואה לתמונה תלת-ממדית של גידול דומה באמצעות הפרוטוקול המתואר. לאחר השליטה בטכניקה, החל משלב חילוץ הלשון ועד לרינדור התלת-ממדי הסופי, ניתן לבצע את התהליך תוך כשעתיים אם הוא מבוצע כראוי. בעת ביצוע פרוטוקול זה, יש להיזהר לא לנקב את הלשון עם המחט, כדי למנוע איבוד של תאי גידול המפריע למעקב אחר הגידול. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע בדיקה של תרכובות טיפוליות או תאים עם רמות חלבון שעברו מניפולציה, על מנת לקבוע את יעילותם נגד פלישה של סרטן הפה.במסגרת ניסוי in vivo, יש לזכור כי עבודה עם תאי גידול אנושיים ששונו באמצעות לנטי-וירוס היא מסוכנת; יש לנקוט תמיד באמצעי זהירות, כגון ציוד מיגון אישי (PPE) מתאים ועבודה במכסיר זרימה למינרית מאושר לרמה BSL 2, בעת העבודה עם עכברים מוזרקים.

multi-photon-imaging-tumor-cell-invasion-an-orthotopic-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

דגם orthotopic של סרטן השחלות הצפק ב עכברים immunocompetent עבור In vivo הדמיה ניטור הגידול של המערכת החיסונית גידול

הדמיה של פליטת אור ועין מתנהלת פעילות היפוקסיה, גורם 1α מוחל לפקח היפוקסיה תוך גולגולתי התפתחות גידולים של סרטן השד מודל גרורות במוח העכבר.

בתחום ההדמיה vivo של פליטת אור Dynamics היפוקסיה גידול של גרורות סרטן השד המוח במודל של עכברים

בסרטון זה, אנו מפתחים מודל אורתוטופי של סרטן ראש וצוואר על ידי חיסון תוך רירית של קו תאי קרצינומה של תאי קשקש. העכבר נושא הגידול יראה דמיון לסימפטומים רלוונטיים מבחינה קלינית של מחלה אנושית ולכן ניתן להשתמש בו כדי לחקור את התקדמות הסרטן ולגלות אסטרטגיות טיפוליות חדשניות.

חיסון תוך רירית של תאים סרטניים במודל מורין: הליך להקמת מודל אורתוטופי לסרטן הראש והצוואר

אנו מתארים שיטה לתגובת הדמיה לטיפול נגד...

חי הדמיה של תגובות סמים בmicroenvironment הגידול במודלים עכבריים של סרטן השד

הקמנו מודל גליובלסטומה orthotopic קליפת המוח בעכברים לשני הפוטונים במיקרוסקופ intravital שמשחזר אילוצי biophysical בדרך כלל במשחק במהלך הצמיחה של הגידול. חלון זכוכית כרוני החלפת הגולגולת מעל לגידול מאפשר המעקב של התקדמות הגידול לאורך זמן על ידי שני פוטונים במיקרוסקופ.

Glioblastoma עכבר דגם orthotopic שמירה על אילוצי המוח של רקמת ריאה, פיסיים ומתאים לשני פוטונים במיקרוסקופ Intravital

מודל גידול ראשוני orthotopic סרטן השד סר כירורגית של גידול ראשוני כדי להאריך את חיי עכבר כדי ליצור גרורות ספונטניות מתוארים. גידול הגידול ולהתפתחותו מנוטר לכמת ידי דימות פלואורסצנטי בלוציפראז.

במודל עכבר orthotopic של שד ספונטני סרטן גרור

כאן אנו מציגים שיטה ישימה לפיתוח מודל מאתר orthotopic של הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים. גידולים מדגימים הרלוונטית קלינית תכונות histopathological של המחלה, לרבות נמק, בידול המסכן, גרורות קטרי הסתננות המערכת החיסונית. עכברים נושאות לפתח תסמינים הרלוונטית קלינית כולל בבליעה, הלסת הזחה של ירידה במשקל.

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

כתב היד מתאר מתודולוגיה להקמה וכן ניטור גדילה אורכי של גרורות ריאה ספונטניות מגידולי שד בהזרקה אורתוטופית, הניתנת להתערבות בכל שלבי המפל הגרורתי.

ב Vivo הדמיה למדידת גרורות ריאה ספונטניות של תאי גידול שד בהזרקה אורתוטופית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את ההשתלה וההערכה של מלנומה בכורואיד מורין תוך שימוש בטומוגרפיה קוהרנטית אופטית.

השתלה והערכה של מלנומה בכורואיד מורין באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

תרגום ממצאי המיקרוסקופ התוך-חיוני מאותגר על ידי חדירת העומק הרדוד שלו לרקמה. כאן אנו מתארים מודל עכבר תא חלון גבי המאפשר רישום משותף של מיקרוסקופיה תוך חיונית ושיטות הדמיה ישימות קלינית (למשל, CT, MRI) למתאם מרחבי ישיר, מה שעשוי לייעל את התרגום הקליני של ממצאי מיקרוסקופ תוך חיוני.

מודל עכבר גידול בתא החלון הגבי למיקרוסקופיה תוך-חיונית משולבת והדמיית תהודה מגנטית בחקר סרטן תרגומי

שיטה ייחודית לכריתה כירורגית של גידולי קרצינומה של תאי קשקש אוראליים שנוצרו בחלל הפה מוצגת כאן.

מודל כריתת גידול רלוונטי לתרגום עבור מודלים פרה-קליניים של עכברים של קרצינומה של תאי קשקש בפה

חקור הדמיית פלישת תאים סרטניים בלשון עכבר באמצעות מיקרוסקופיית שני-פוטון. שיטה זו מאפשרת הערכה כמותית של חדירת הגידול ופיתוח תרופות נגד פלישה.

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

גלה סרטונים נוספים