7 באוגוסט 2011
מאמר זה מתאר את ההליכים לביצוע בדיקה שלאחר המוות הבסיסי של עכבר או חולדה, ואת אוסף של איברים בסיסיים, כמו גם סוגי המדגם מאתגר יותר מ להערכה היסטולוגית, מיקרוביולוגית, ו-PCR.
המטרה הכוללת של הליך זה היא לבצע נתיחת מכרסמים בסיסית. זה מושג על ידי רישום מידע בסיסי על החיה. השלב השני של ההליך הוא בדיקת הקרביים.
השלב השלישי הוא איסוף דגימות כמו איברים או בלוטות לימפה מזנטריות. בסופו של דבר, ניתן לקבוע את מצבו הבריאותי של בעל חיים באמצעות היסטופתולוגיה או טכניקות אחרות. בדרך כלל, אנשים חדשים בביצוע נתיחה יתקשו מכיוון שאנטומיה של מכרסמים למדה בעבודה.
שיטות אלה יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח לגבי בריאותם של בעלי חיים במושבת מחקר. הדגמה חזותית של טכניקות אלו חיונית מכיוון שלוקח זמן ללמוד את מיקומן של רקמות שונות וכיצד לזהות רקמות נורמליות מחריגות. לפני המתת חסד של בעל החיים, אסוף מידע על ההיסטוריה שלו ורשום את המאפיינים הנוכחיים שלו כגון מצב גופני, התנהגות, מין, גיל, משקל, מתח וכן הלאה.
רשומה זו היא גיל חיוני לאדם שיבדוק את הרקמות לפני המתת החסד של בעל החיים. ודא שנעשה שימוש בציוד מגן אישי מתאים. הכן דיסקציה, מלקחיים ללוח, מספריים, תוויות למכולות, קיבוע, מדיה וכלי איסוף.
לאחר המתת חסד של בעל החיים, העריכו את מצבו הגופני, בדקו אם יש חריגות בעור ובפרווה, רזון והתייבשות. חפש גם עדויות למניפולציות מלאכותיות, שתלים או צלקות כירורגיות על בעל החיים. לאחר מכן, בעזרת מיקרוסקופ מנתח, בדוק את כל הפתחים החיצוניים בפירוט.
אלה כוללים את האוזניים, העיניים, האף, הפה, פי הטבעת ואיברי המין. כעת, השכיבו את החיה על גבה על לוח הדיסקציה, הרימו את עורו בעזרת מלקחיים והשתמשו במספריים כדי לחתוך את העור מפי הטבעת ועד הסנטר. לאחר מכן, החזירו את העור לצדדים וחתכו את דופן הבטן וכלוב הצלעות.
חשוף את קרביים בית החזה על ידי ביצוע שני חתכים לרוחב בכל צד של כלוב הצלעות. חותכים את הסרעפת. לאחר מכן הסר את כלוב הצלעות על ידי חיתוך לרוחב החלק העליון של עצם החזה.
כעת, בדוק את איברי בית החזה והבטן החשופים. דע כל שינויי צבע, ריחות חריגים, גודל, הבדלים ואיברים חסרים או נקעים. בחנו את העקביות של משטחי האיברים ושימו לב לגושי רקמות או כיסים מלאים בנוזלים.
כמו כן, שימו לב לנוכחות נוזל בכל אחד מהחללים. המשך את הבדיקה במערכת העיכול. בדוק את המזנטריה לאיתור בלוטות לימפה מוגדלות או מסות רקמה.
תאר את תכולת מערכת העיכול ובדוק היטב אם יש דפנות מעובות, גושים או דימום. כדי לבחון את פנים הכליות, השתמש בלהב כדי ליצור חתך אורך של הכליה השמאלית וחתך רוחב של הכליה הימנית ממרכז קו האמצע. בדוק את הפרנכימה לאיתור חריגות.
כעת בדוק את מערכת השתן אצל גברים. זהה את שלפוחיות הזרע, האשכים, האפידידימוס, השופכנים ובלוטות הפרוזה אצל נקבות. זהה את הרחם, השחלות והשופכנים.
בדוק את המערכת האורוגניטלית לאיתור חסימות, כיסי נוזלים, דימום או חריגות אחרות. לאחר השלמת בדיקות אלה, יש לבודד ולכרות את איברי המטרה לבדיקה נוספת. בדרך כלל, הלב, הכבד, הכליות והטחול נאספים תוך כדי כריתתם.
טבלו כל איבר בקיבוע או בצעו את הצעדים הראשונים של פרוטוקול הדורש מרקמות אלה כגון הקפאה או אימונוהיסטוכימיה כדי לקבל קיבוע הולם. בדרך כלל, רקמות שקועות בחומר משמר כמו 10% NBF ביחס של 20 נפחים קבועים לרקמה בנפח אחד. בעבודה עם חולדות, יש לאסוף את שאיבת הסימפונות לפני שאיבת האף.
התחל בהחזרת העור ברקמות תת עוריות הרחק מאזור צוואר הרחם, ובכך לחשוף את בלוטות הרוק ואת שרירי צוואר הרחם. לאחר מכן הסר את הרקמות הללו כדי לחשוף את קנה הנשימה. בצע חתך של שלושה מילימטר לקנה הנשימה והכנס פיפטה עמוסה במיליליטר אחד של נוזל דגימה ללומן קנה הנשימה המכוון אחת לרבעון.
שטפו לאט את נוזל הדגימה דרך קנה הנשימה ולתוך הריאות שלוש פעמים. לאחר מכן משוך את נוזל הדגימה והסר את הפיפטה מקנה הנשימה. לא כל הנוזל יחזור לפיפטה.
לכן, חזור על התהליך אם יש צורך בנוזל נוסף. לבדיקה בעכברים. כדי לקחת דגימת שאיבת אף או שאיבת סימפונות, גש ל-ATU הלוע של האף באמצעות מספריים מעוקרים.
נתק את מפרק הלסת התחתונה הטמפורלי והחזיר את הלסת התחתונה הרחק מהלסת העליונה, וחשוף את הלוע של האף כדי לאסוף את שאיבת האף. הכניסו פיפטה עמוסה במיליליטר אחד של נוזל דגימה לתוך אטו הלוע של העכבר, או לומן קנה הנשימה של החולדה. יש לכוון את הפיפטה פנימה ולדחוף אותה פנימה.
אז הקצה יוצר קשר עם חיך האף. ברגע שיש להזריק לאט את נוזל הדגימה. כאשר הנוזל נכנס לחלל האף, הוא ייצור מניסקים בפתח האף ואמור להיות גלוי גם דרך חיך הפה השקוף.
עם זאת, אם נוזל יוצא דרך הפה, כוון מחדש את הפיפטה. לאחר ההזרקה המלאה, משוך את נוזל הדגימה מחלל האף לתוך הפיפטה, ולאחר מכן הסר את הפיפטה. התחל באחיזת קנה הנשימה עם מלקחיים וחתוך דרכו ממש מעל המלקחיים.
לאחר מכן, משכו בעדינות את קנה הנשימה כלפי מעלה, חתכו את חיבורי הרקמות עד שניתן יהיה לכרות את כל מערך רקמות בית החזה. כעת, הניחו את הריאות שטוחות על משטח העבודה, וקשרו באופן רופף חתיכת תפר או חוט סביב קנה הנשימה. אל תהדק את הקשר, אחרת לא תוכל להעביר את המחט לקנה הנשימה.
כעת, מלאו מזרק בקיבוע והכניסו את המחט לפתח קנה הנשימה תוך הצמדת קנה הנשימה למחט. בעזרת מלקחיים, מלאו לאט את הריאות בקיבוע עד שהן מנופחות לחלוטין. נפח הקיבוע ישתנה בהתאם לגיל החיה, הזן והבריאות.
אם רקמות לא מנופחות ייראו שטוחות, אם מנופחות יתר על המידה, נוזל מוקצף יחלחל מהרקמה לאחר המילוי, הדק את חומר התפר או החוט המקיף את קנה הנשימה כדי למנוע זרימה חוזרת של קיבוע מהריאות. לאחר מכן הניחו את הריאות המנופחות במקבע. הניחו את הפגר על לוח חיתוך נקי בשכיבה על הגחון והשתמשו במספריים ובמלקחיים כדי להסיר את העור והשריר המכסה את השוק.
ואז ערפו את ראש הפגר בעזרת מספריים קטנים. הכנס את הלהב התחתון לתוך מגנום הנקב וחתוך את קו האמצע של הגול בתנועה כלפי מעלה. כעת, חשפו את המוח עם מלקחיים על ידי משיכת העגל.
אם הפתולוג מעדיף לחתוך חלקים מהמוח בעודו בגולגולת, הנח מיד את הגולגולת עם המוח החשוף ל-10% NBF. אחרת, תפסו את הראש סביב האף בעזרת מלקחיים או אצבעות והפכו בעדינות את הגולגולת כך שכוח הכבידה יעזור לרקמה ליפול מהגולגולת. בזהירות. החלק מלקחיים לאורך הקצה החיצוני של המוח החל מאונות הריח.
המשך להחליק את המלקחיים לאורך הגולגולת לכיוון המוח הקטן, תוך צביטה עדינה של עצבים באותם מלקחיים. כאשר המוח משחרר מקום לקיבוע, כדי לאתר תחילה את בלוטות הלימפה המזנטריות, אתר את החלק הגדול בצורת תקשורת של המעי. בלוטות הלימפה המזנטריות הן גושי הרקמה הצהובים, הביצים או הכדוריים במזנטריה הסמוכה לצקום.
לעתים קרובות הם מעט עבים ומוצקים יותר במרקם מהמזנטריה והשומן שמסביב. היקף ניתוח עשוי להיות שימושי להבדיל רקמות בהתחלה, אך עם ניסיון זה לא יהיה נחוץ. בעזרת מלקחיים ומספריים, בודדו את בלוטות הלימפה המזנטריות, ואז העבירו אותן לצינור אחסון שישמש לתרבות, PCR או היסטופתולוגיה.
לאחר השלמת הפרוטוקול, הדברים הבאים זמינים לפתולוג או למדען, דו"ח כתוב על מצב אובייקטיבי וסובייקטיבי בהמתת חסד. תיאור אובייקטיבי של הרקמות לפני קיבוען, כל איברי הבטן ובית החזה העיקריים בקיבוע, המוח ובלוטות הלימפה המזנטריות ודגימות של אף וסימפונות שואבים. לאחר שליטה, נתיחה מקוצרת יכולה להימשך פחות מ -30 דקות.
בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לתעד את התצפיות שלך על מצב החיה ורקמותיה. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לבצע נתיחת מכרסמים מלאה, כולל איסוף של ריאות מפוצצות, בלוטות לימפה מזנטריות והמוח.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מאמר זה מתאר את הפרוצדורות לביצוע בדיקה פוסט-מורטם בסיסית של עכבר או חולדה. הוא כולל איסוף של איברים בסיסיים וסוגי דגימות מאתגרים יותר לצורך הערכה היסטולוגית, מיקרוביולוגית ובדיקת PCR.
נתיחה לאחר המוות (necropsy) מקיפה ואיסוף רקמות ממוקד במכרסמים מהווים את הבסיס לאמינותם של מודלים פרה-קליניים של מחלות ולניטור גורמים זיהומיים במחקר ופיתוח ביו-פרמצבטי. פרוטוקולים סטנדרטיים לדגימה של איברים, קשרי לימפה ואספירציה משפיעים באופן ישיר על יכולת הפירוש של היסטופתולוגיה, מיקרוביולוגיה ואבחון מולקולרי. יכולות אלו חיוניות להפחתת סיכונים מכניסטיים ולהמשכיות תרגומית (translational continuity) לאורך תהליכי הגילוי והעבודה הפרה-קלינית.
פרוטוקול נKרופסיה זה ואיסוף רקמות ממוקמים בממשק שבין ביולוגיית גילוי in vivo לוולידציה פרה-קלינית, ותומכים בתזרימי עבודה החל מבדיקת השערות ועד לזיהוי מולקולות מובילה (lead identification) ומחקר תרגומי.