מודל הקרנית Porcine Ex vivo של קרטיטיס חיידקית: טכניקה ליצירת זיהום חיידקי בתאי אפיתל בקרנית
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 5:00 דק׳ • July 8th, 2025
בעין החולייתנים, הקרנית - כיסוי המגן החיצוני ביותר - נגועה ב- Pseudomonas aeruginosa, וכתוצאה מכך מצב דלקתי בקרנית - קרטיטיס.
כדי לבסס מודל של קרטיטיס בקרנית ex vivo, הנח כפתור קורנאוסקלרלי של עין חזיר בצלחת פטרי. קטע רקמה זה מורכב מהקרנית המוקפת בשרידי סקלרה - כיסוי העיניים הסיבי. השלימו את צלחת הפטרי בחומר המכיל אנטיביוטיקה כדי לחסל חיידקים מזהמים מפני השטח של האפיתל בקרנית.
אתר את החלק המרכזי של הקרנית. בצע חתכים אופקיים ואנכיים שטחיים בתבנית הרצויה החודרים את שכבת האפיתל החיצונית ביותר של הקרנית. מעבירים את הרקמה החתוכה, כשהקרנית כלפי מטה, לתבנית חלולה מיוחדת.
מלאו את חלל הקרנית באגר נוזלי והניחו להתמצקות, ורסנו את הרקמה בתוך התבנית. הפוך את התבנית כדי לחשוף את המשטח הפצוע של אפיתל הקרנית. פיפטה את מתלה הפסאודומונס לתוך האזורים החתוכים של הקרנית. כסו את התבנית במצע גידול נוסף לצמיחת חיידקים אופטימלית. משלימים את מנת התרבות במדיה ומדגרים.
חיידקים חוצים את חתך האפיתל כדי לפלוש לסטרומה. בתוך הסטרומה, חיידקים גורמים לחדירת תאי חיסון, חלבונים ונוזלים בקרנית וכתוצאה מכך תגובה דלקתית. הצטברות הנוזלים מגבירה את אטימות הקרנית, ומאשרת קרטיטיס חיידקית.
מוציאים את המדיה מצלחת הפטרי, ושוטפים את הקרניות פעמיים עם מיליליטר אחד של PBS סטרילי. החזיקו את הקרנית בעזרת מלקחיים וסחטו בעדינות. השתמש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים