מודל ריאות חזיר Ex vivo של ביופילם: טכניקה לפיתוח מודל ריאות לחקר ביופילמים חיידקיים על רקמת ברונכיולר חזיר
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 4:35 דק׳ • July 8th, 2025
הסימפונות הם דרכי הנשימה הצינוריות של הריאות. במהלך זיהום כרוני, הסימפונות נסתמים עקב הצטברות ריר. הריר העשיר בחומרים מזינים מספק סביבה מתאימה לצמיחת חיידקים אופורטוניסטיים. חיידקים אלה מוטמעים במטריצה פולימרית חוץ-תאית המיוצרת בעצמה ומתרבים ליצירת ביופילם.
כדי לחקות התפתחות ביופילם של חיידקים על הריאות, קחו דגימת רקמת סימפונות חזיר בצלחת פטרי. מנתחים את הרקמה לחתיכות בצורה הרצויה. הוסף מצע תרבית ביופילם לצלחת הפטרי. עקר את הכלי באור UV כדי להסיר מזהמים על פני השטח.
העבירו את חלקי הרקמה המעוקרים לצלחת מרובת בארות המכילה אמצעי תרבית ביופילם ורפידות אגרוז, המשמשות כמצע אופטימלי להדבקת חיידקים. לאחר מכן, דוקרים קצה מחט המכיל מושבה של החיידקים הרצויים על כל פיסת רקמה כדי להכניס חיידקים פלנקטוניים לרקמה. אטום את הצלחת עם קרום נקבובי מעוקר UV המקל על חילופי חמצן אחידים בכל משטח הצלחת. דגרו את הצלחת האטומה.
במהלך הדגירה, חיידקים נצמדים באופן בלתי הפיך לפני השטח של האפיתל דרך פילי ומתחילים להפריש את המטריצה החוץ-תאית. בתוך המטריצה, חיידקים מנצלים את מקורות האנרגיה, המוצין וה-DNA החופשי מאמצעי התרבית ליצירת ביופילמים. מודל הביופילם החיידקי מוכן לבדיקות נוספות.
מניחים את הסימפונות בכביסה הראשונה של DMEM/RPMI 1640. השאירו אותו בכביסה, וקצרו חלקים נוספים של סימפונות מאותה ריאה כדי להניב מספיק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים