אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:47 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם גזע ותא אב המטופויאטי אימורטלטי, iHSPC, תרבית במדיה המכילה הורמון סטרואידים ספציפי וציטוקין המטופויאטי המווסת את התפשטות התאים במצב לא מובחן. הוסף פולימר קטיוני מתאים ווקטורים לנטי-ויראליים.
נגיפים רקומביננטיים נושאים רצפי קידוד ל-RNA קצר סיכת ראש, shRNAs, המכוונים לגן מארח ספציפי וגן סמן עמידות לאנטיביוטיקה.
צנטריפוגה לתאי משקעים ווירוסים. במהלך הדגירה, פולימרים קטיוניים מנטרלים את מטעני קרום התא, ומשפרים את הקישור הנגיפי. לאחר איחוי הממברנה, חומר גנטי ויראלי ואנזימים משתחררים לתוך הציטופלזמה התאית. הגנום הנגיפי מתועתק הפוך, עובר לגרעין ומשתלב בגנום המארח.
בהשפעת מקדם ספציפי במבנה, מבנה הגן shRNA המורכב מרצף תואם mRNA מטרה, קטע לולאה ורצף נוסף המשלים לראשון, מתומלל ויוצר shRNA עם קטע לולאה של נוקלאוטידים לא מזווגים. לאחר השעתוק, shRNA מיוצא לציטופלזמה.
ריבונוקלאז ספציפי מבקע את קטע הלולאה, ויוצר RNA דו-גדילי, siRNA. siRNA משולב בקומפלקס ההשתקה המושרה על ידי RNA, גדילי RISC ו-siRNA נפרדים. הקומפלקס המופעל עם הגדיל השמור המשלים ל-mRNA המטרה מזהה ונקשר ל-mRNA המטרה באופן ספציפי לרצף, מווסת באופן שלילי את הביטוי ומתווך את דיכוי גן המטרה.
דגרו על התאים עם אנטיביוטיקה ספציפית. התאים המתומרים ביציבות מבטאים את גן העמידות לאנטיביוטיקה המאפשר את בחירתם. רענון מדיה ודגירה, המאפשר הת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים