ביטוי גנים מבוסס מערכת מושרה Tet-On ב- Vivo: מערכת ביטוי גנים המושרה על ידי טטרציקלין להפעלת שעתוק גני מטרה במודל עכבר
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:27 דק׳ • July 8th, 2025
מערכת טטרציקלין-און או טט-און היא מערכת ביטוי גנים מותנית המפעילה ביטוי של גן מעניין בנוכחות טטרציקלין או האנלוגי שלו, דוקסיציקלין.
התחל עם עכבר מהונדס גנטית עם גנום שונה המכיל גן המקודד חלבון מפעיל שעתוק מבוקר טטרציקלין הפוך, או rtTA, המונע על ידי מקדם ספציפי לכבד בתאי הכבד או הפטוציטים. בנוסף, העכבר מכיל גן מעניין בשליטת אופרטור טטרציקלין או רצפי tetO הממוקמים במעלה הזרם ומאוחים באופן סלקטיבי למקדם מינימלי. ה-tetO והמקדם נקראים האלמנט המגיב לטטרציקלין, או TRE.
ה-rtTA המבוטא - חלבון היתוך המורכב ממדכא הטט, tetR ותחום הטרנסאקטיביות של החלבון הנגיפי VP16 - יוצר דימרים, שאינם פעילים ואינם יכולים להיקשר לרצף tetO של ה-TRE, ומונעים את הפעלת ביטוי גן המטרה.
הכינו תמיסה המכילה דוקסיציקלין וסוכרוז. תוספת סוכרוז מגבירה את הטעם. לאחר הסינון, ספק את תמיסת הדוקסיציקלין-סוכרוז כמי שתייה לעכבר. הדוקסיציקלין הניתן מצטבר בכבד.
בהפטוציטים, דוקסיציקלין נקשר ל-rtTA, וגורם לשינוי קונפורמציה וזיקה מוגברת לאתר קשירת ה-DNA של tetO. תחום קשירת ה-DNA tetR של rtTA הקשור לדוקסיציקלין נקשר לרצף tetO של אלמנט ה-TRE. תחום ה-VP16 מגייס עוד יותר RNA פולימראז, מה שמוביל לשעתוק, יצירת mRNA וביטוי לאחר מכן של גן המטרה המדווח במורד הזרם.
לניסויים של פחות מ-10 ימים, יש לתת דוקסיציקלין באופן רציף באמצעות מי שתייה באמצ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים