Morpholino Mediated Gene Editing: טכניקת הפלת גנים באמצעות חסימת מורפולינו אוליגונוקלאוטידים בביצי דגי מערות חד-תאיים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:30 דק׳ • July 8th, 2025
מורפולינים הם אוליגונוקלאוטידים קצרים וחד-גדיליים שעוצבו מחדש עם הבדלים בעמוד השדרה של הפוספט ובמבנה הסוכר שלהם בהשוואה לנוקלאוטידים טבעיים. תכונות אלה משפרות את יציבות המורפולינוס ב-pH הפיזיולוגי. למרות הווריאציות הללו, המורפולינים מכילים את הנוקליאובסיסים הסטנדרטיים, המסייעים בתכנון אוליגונוקלאוטידים משלימים לרצף ה-mRNA הספציפי מגן מטרה רצוי שיש להפיל.
כדי לבצע עריכה גנטית מונעת מורפולינו, התחל בלקיחת ביצי דג מערות חד-תאיות המונחות בתוך הבארות של צלחת הזרקת אגרוז. דמיינו את הביצים השקופות והעגולות כדי לאתר את שק החלמון - מבנה מלא בנוזל הקיים בתוך הביצה.
קח מחט מיקרו-הזרקה מלאה מראש בתמיסה המכילה מורפולינים מעוצבים. הזריק את התמיסה ישירות לחלמון הביצה, וודא שמורפולינים נכנסים לציטופלזמה של התא. בתוך התאים, גן המטרה יוצר את ה-mRNA, המועבר לציטופלזמה.
בתוך הציטופלזמה, המורפולינו המוזרק הכלאה עם תעתיק ה-mRNA המשלים שלו באתר ההתחלה האנדוגני ומשתרע מעבר לו. תהליך זה חוסם את הקישור של תת-היחידה הגדולה יותר של הריבוזום עם קומפלקס התחלת התרגום המתהווה המורכב מתת-יחידה ריבוזומלית קטנה המורכבת עם כמה חלבונים ספציפיים.
לאחר מכן, התקדמות קומפלקס התחלת התרגום מעוכבת באופן סטרי, מה שעוצר את תרגום ה- mRNA לחלבון. לבסוף, ריכוז חלבון המטרה יורד עקב חסימה תרגומית על ידי מורפולינים.
ביום ההזרקה, השת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים