אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:40 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם עוברי דג זברה בני קיימא בשלב חד-תאי המונחים בבארות של תבנית מיקרו-הזרקה.
טען מחט מיקרו-הזרקה עם תמיסה המכילה mRNA מקודד טרנספוזאז Tol2 ופלסמידים של תורם טרנספוזון. הפלסמידים מורכבים ממקדם דג זברה בכל מקום וגן מקודד חלבון פלואורסצנטי המוקף בזרועות טרנספוזון Tol2.
הזרקו בזהירות את תמיסת המיקרו-הזרקה לציטופלזמה של עובר דג הזברה. בתוך התא, mRNAs של טרנספוזאז Tol2 מתורגמים לחלבוני טרנספוזאז Tol2 ומועברים באופן פעיל לגרעין.
אתרי Tol2 בפלסמיד התורם מורכבים מחזרות טרמינליות הפוכות ספציפיות, או ITRs, המאגפות את הגן המדווח. ה-ITR מוקפים בחזרות קצרות וישירות. חלבוני טרנספוזאז מזהים ונקשרים לאתרי ה-ITR, ויוצרים סיכת ראש על ה-DNA האגפי. טרנספוזות מבקעות עוד יותר את מבנה הטרנספוזון מהדנ"א המאגף, משחררות אותו מהפלסמיד ומשאירות אחריהן חזרות קצרות וישירות.
טרנספוזות יוצרות שבירה כפולה מדורגת בגנום התא הסומטי ומכניסות את מבנה הטרנספוזון לאתר הגנום. מילוי הרווח של הקצוות המדורגים על ידי DNA פולימראז ואחריו קשירת החתכים יוצרים חזרות קצרות וישירות.
הקשירה גורמת לאינטגרציה יציבה של מבנה טרנספוזון בגנום התא הסומטי, והמקדם מקל על ביטוי חלבון פלואורסצנטי. דגירה על העוברים המוזרקים. במהלך ההתפתחות העוברית, תאים סומטיים מולידים סוגי תאים שונים ויוצרים דג זברה טרנסגני.
לאחר הכנת ה-mRNA של טרנספוזאז To
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים