בדיקת הגנת אנזים מבוססת ליזוסטפין: שיטה חוץ גופית לכימות עומס סטפילוקוקוס זהוב תוך תאי על ידי הרג סלקטיבי בתיווך אנזים של חיידקים חוץ-תאיים

התחל עם שכבה אחת של תאי אפיתל במדיום תרבית מתאים. תאים אלה מבטאים אינטגרינים - קולטני שטח המשתרעים על פני הממברנה. אמצעי התרבות מכיל פיברונקטין המופרש על ידי תאי אפיתל - גליקופרוטאין.

הוסף השעיה של Staphylococcus aureus - חיידק פתוגני גרם חיובי - לצלחת התרבות. חיידקים אלה מכילים חלבונים קושרי פיברונקטין, או FnBPs, המעוגנים בדופן התא שלהם.

דגרו על הצלחת כדי ליזום זיהום חיידקי, שבו הפיברונקטין נקשר ל-FnBP של החיידק ולאינטגרינים בתאי המארח האפיתליים. אינטראקציה משולשת זו של FnBP-פיברונקטין-אינטגרין מתווכת הפנמה חיידקית במארח.

טפל בתאים עם ליזוסטפין - אנזים אנדופפטידאז - ודגר. ליזוסטפין נכנס באופן סלקטיבי לדפנות התא של חיידקים חוץ-תאיים. הוא מבקע את גשרי הפנטגליצין בפפטידוגליקנים, ובכך לייז אותם בעוד החיידקים התוך-תאיים נשארים מוגנים מפני ליזוסטפין.

השלם את התרבית עם אנזים פרוטאוליטי כדי לנטרל את הליזוסטפין שנותר, ולמנוע ממנו להרוג את החיידקים התוך תאיים בשלבים.

הוסף מאגר ליזה לתרבות, שקורע את תאי האפיתל המארח ומשחרר חיידקים תוך תאיים בליזאט התא. לאחר מכן, צלחו את ליזט התא המכיל חיידקים על צלחת תרבית מתאימה ודגרו.

החיידקים גדלים ומתרבים ליצירת מושבות חיידקים, שאותן ניתן לנתח כדי להעריך את מידת ההפנמה של החיידקים בתאי המארח.

לפני חיסון התאים, התבונן בכל באר של צלחת 24 הבארות על ידי מיקר