אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:39 דק׳ • July 8th, 2025
כאשר הם נחשפים לאלרגן - אנטיגן לא פתוגני - תאים מציגי אנטיגן מעבדים ומציגים את האלרגן ללימפוציטים מסוג 2. לימפוציטים אלה מעוררים לימפוציטים מסוג B להתמיין לתאי פלזמה ולייצר נוגדנים אימונוגלובולינים E, IgE, הנקשרים לקולטני Fc ספציפיים ל-IgE בעלי זיקה גבוהה על פני השטח של בזופילים במחזור - תאי הפרשה המכילים גרגירים.
עם חשיפה לאחר מכן לאלרגן, קומפלקסי ה-IgE-Fc מזהים את האלרגן ומצטלבים איתו, ומפעילים בזופילים לשחרור גרגירים הכוללים מתווכים כמו ציטוקינים ואנזימים ליזוזומליים כולל β-הקסוזמינידאז, המעוררים תגובה דלקתית חזקה.
כדי לסנן את הפוטנציאל האלרגי של אנטיגן בדיקה במבחנה, התחל בהשעיה של בזופילים סרטניים של חולדות שהועברו המבטאים קולטני Fc ספציפיים ל-IgE אנושיים. יש לטפל בסרום אנושי המכיל IgE מתורם אלרגי. נוגדני ה-IgE נקשרים לקולטני ה-Fc של הבזופילים וגורמים להם לרגישות.
לאחר מכן, הוסף חיץ ונפח מספיק של אנטיגן בדיקה לבזופילים הרגישים. האנטיגן, בהתאם לזיקתו ל-IgE הקשור לקולטני Fc, מתחבר עם הנוגדנים ויוזם דה-גרנולציה של בזופיל, ומשחרר מתווכים כולל β-הקסוזמינידאז לתמיסה.
אוספים את התמיסה לצלחת מרובת בארות טרייה המכילה מצע פלואורוגני של β-הקסוזמינידאז ודוגרים. β-הקסוזמינידאז מבצע הידרוליזה של המצע, ויוצר תוצר פלואורסצנטי. לאחר הדגירה, הוסף מאגר pH גבוה כדי לעכב את פעילות β-הקסוזמינידאז ול
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים