בדיקת ספיגת סידן מיטוכונדריאלי: שיטה מבוססת קורא צלחות למדידת ספיגת סידן במיטוכונדריה מבודדים

מיטוכונדריה לוקחת סידן ציטוזולי מכיוון שהוא חיוני לתפקודם התקין.

זרם סידן מוגזם למטריצה המיטוכונדריאלית - עומס יתר של סידן מיטוכונדריאלי - מפעיל את פתיחת תעלת הממברנה הפנימית, נקבוביות מעבר החדירות המיטוכונדריאלית או MPTP. הנקבוביות הפתוחות מאפשרות פליטת סידן מוגברת מהמיטוכונדריה, מה שגורם לתפקוד לקוי של המיטוכונדריה.

כדי למדוד את ספיגת הסידן המיטוכונדריאלית, התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה מיטוכונדריה מבודדת התלויה במאגר מתאים. השלם את הבאר עם פירובט ומלאט, שהם מצעים המייצרים ATP. מערבבים את תכולת הבאר ודוגרים.

במהלך הדגירה, פירובט ומלאט מומרים ל-ATPs, וממריצים את המיטוכונדריה. הוסף תמיסה המכילה מולקולות צבע פלואורסצנטיות אטומות לממברנה המיטוכונדריאלית ורגישות לסידן. העבירו את המאגר המכיל סידן למיטוכונדריה האנרגטית.

עקוב אחר פלואורסצנטיות הסידן של הצבע כאשר מולקולות הצבע נקשרות לסידן החופשי במאגר.

הוסף עוד יוני סידן כדי להתחיל זרם סידן מיטוכונדריאלי. הסידן המיטוכונדריאלי הגדל בהדרגה מפחית את יוני הסידן במאגר, ומפחית את פלואורסצנטיות הסידן של הצבע.

ברגע שהמיטוכונדריה מגיעים ליכולת נשיאת הסידן המקסימלית שלהם, הוספה נוספת של יוני סידן פותחת את תעלות ה-MPTP ומייבאת סידן למאגר. סידן המאגר נקשר למולקולות הצבע, וגורם לפלואורסצנטיות מוגברת של סידן בצבע.

שרטט את הקרינה של הצבע בנקודות זמן