Name: אופטימליים PCR מבוססי זיהוי של Mycoplasma (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: למדו לזהות זיהום מיקופלזמה בתרביות תאים באמצעות ערכת PCR ייעודית. השיטה כוללת הכנת דגימות, מחזורי טמפרטורה ואלקטרופורזה על ג'ל אגרוז לקבלת תוצאות אמינות במהירות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

הממומן על ידי סיגמא אולדריץ

1. Mycoplasma איתור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות supernatants סלולרי ניתן לבדוק באופן ישיר או המדגם יכול מוכן לשימוש במועד מאוחר יותר. כדי להכין לשימוש מאוחר יותר במקום 100 μl של supernatant בתוך שפופרת הגברה דגירה סטרילית על 95 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. ברגע זה הוא להשלים את המדגם ניתן לאחסן ב 2-8 מעלות צלזיוס עד שבוע. רק לפני הפעלת צנטריפוגות מדגם בקצרה (5 שניות) על גלולה כל פסולת הסלולר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את דגימות ה-PCR, לקבוע את הנפח הכולל של המאגר Jumpstart תקי DNA פולימראז / התייבשות הדרושים התגובות. אנחנו נהיה הכנת 5 תגובות מוחלטת. חמש תגובות ידרוש 2.5μl של תקי ו 114.5μl של חיץ להחזרת נוזלים. זה יכיל לפחות יחידה אחת של תקי לכל התגובה 22.5μl של חיץ התייבשות לכל תגובה מדגם שליטה שלילי בתוספת 24.5μl של חיץ התייבשות לשליטה חיובית. 1 יחידה של פולימראז ה-DNA לכל תגובה יש להוסיף נפח מתאים של חיץ להחזרת נוזלים. זה ישתנה עם תקי בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את נפח מחושב של פולימראז הדנ"א תקי לתוך צינור microcentrifuge נקי ופעל עם נפח המחושב של חיץ להחזרת נוזלים. המאגר פולימראז / התייבשות DNA צריכה להיות מעורבת על ידי מצליף בעדינות את הצינורית. תערובת זו לא צריכה להיות vortexed. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את הביקורת השלילית דגימות להשתמש צינורות התגובה שקוף המסופק בערכה. צינורות התגובה המסופק בערכה כבר מכילים את nuclueotides, primers ו-DNA הבקרה הפנימית. 23 μl של Jumpstart לערבב תקי פולימראז / Rehydration למאגר הדנ"א, מוכן כמו בשלבים הקודמים, צריך להיות ממוקם בכל אחד לשלוט שלילי דוגמיות. הוסף 2 μl מים DNA חופשיים לשלוט שלילי ולהוסיף 2 μl של המדגם לכל אחד הצינורות מדגם התווית. מערבבים את תכולת מצליף על ידי צינורות. תוכן לא צריכה להיות vortexed. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את השליטה חיובי להשתמש צינורות התגובה ורוד המסופק בערכה. צינורות התגובה המסופק בערכה כבר מכילים את nuclueotides, primers ו-DNA הבקרה הפנימית. הוסף 25 μl של Jumpstart לערבב תקי פולימראז / Rehydration DNA חיץ, מוכן כמו בשלבים הקודמים, את צינורות התגובה התווית. מערבבים את תכולת מצליף על ידי צינורות. תוכן לא צריכה להיות vortexed. דגירה שליטה שלילית, שליטה חיובית דוגמיות בטמפרטורת החדר במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור PCR כדי לקחת את המקום דגימות את הצורך להציב Cycler תרמית. בעת שימוש JumpStart תקי צעד הפעלה אינה נדרשת. מניחים את צינורות התגובה Cycler התרמית. מחזורי צריך להיות מוגדר כדלקמן: 94 ° C למשך 30 שניות, 55 ° C למשך 30 שניות ו 72 מעלות צלזיוס למשך 40 שניות. מחזורים אלה ינוהלו 40 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מחזורי PCR השלימו דוגמאות צריך להיות מקורר 4-8 מעלות צלזיוס על ידי הוצאתם Cycler תרמי הכנסתם קרח. כאשר הדגימות התקררו הם צריכים להיות הועמסו על הג'ל agarose עבור אלקטרופורזה. ג'ל טוען וצבע אינם נחוצים כפי שהם כבר נוכח צינורות התגובה. ישירות לטעון 8 μl לכל PCR למסלול נפרד. עצור את אלקטרופורזה לאחר ההגירה של 2.5-3.0 ס"מ. </li></ol> 2. נציג תוצאות השליטה שלילי צריך להראות להקה של כ 481 נ"ב. ניתן לראות זאת בעמודה בקרה שלילית על ג'ל אלקטרופורזה, אשר מוצג בתחילת הסרטון. היעדרם של הלהקה בקרה שלילית על 481 נ"ב הוא אינדיקטור טוב כי פעילות של פולימראז לא היה בשימוש sufficienttaq לא היה רגיש מספיק. דגימות חיוביות Mycoplasma יציג להקות בטווח של 270 ± 8 נ"ב. הלהקה יהיה כבד על דגימות מזוהמות מאוד חלש עבור דגימות מזוהמות קלות. וריאציות בעוצמת ניתן לראות את העמודות מדגם חיובית על ג'ל אלקטרופורזה, אשר מוצג בתחילת הסרטון. כל הדגימות מכילות פקד שלילי פנימי על מנת להוכיח כי PCR התרחש כצפוי. זה נורמלי לראות את היעדר הבקרה הפנימית על דגימות מזוהמות מאוד. אם אין להקה בטווח חיובי או להקה בטווח שלילית על מדגם שלך זה הוא אינדיקטור טוב כי דגימות שלך עכבות. אם המדגם הוא עכבות מעכבי PCR ניתן להסיר על ידי ביצוע מיצוי DNA. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3057/3057fig1.jpg"> . איור 1 להקות Amplicon רלוונטיים: תוצאות של גילוי mycoplasma על ידי PCR מוצגים. ליין 2 הוא שליטה שלילי, שאמורה להראות להקה של כ 481 נ"ב. היעדרם של הלהקה בקרה שלילית על 481 נ"ב הוא אינדיקטור טוב כי השתמשו תקי לא היה רגיש מספיק. Mycoplasma חיובי דגימות יציג להקות בטווח של 270 + 8 נ"ב כפי שמוצג נתיבים 3-6. הלהקה יהיה heaVY עבור דגימות מזוהמות ביותר (נתיב 6), קלוש עבור דגימות מזוהמות קלות (מסלול 4). כל הדגימות מכילות פקד שלילי פנימי (481 נ"ב) על מנת להוכיח כי PCR התרחש כצפוי. זה נורמלי לראות את היעדר הבקרה הפנימית על דגימות מזוהמות מאוד.

<ol><li>Wirth, M., Hauser, H., Drexler, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+and+Sensitivity+of+Polymerase+Chain+Reaction+%28PCR%29+in+Comparison+with+Other+Methods+for+the+Detection+of+Mycoplasma+Contamination+in+Cell+Lines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Specificity and Sensitivity of Polymerase Chain Reaction (PCR) in Comparison with Other Methods for the Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Lines.</a> Journal of Immunological Methods. 164, 91-100 (1993).</li>
<li>Kong, H., Volokhov, D. V., George, J., Ikonomi, P., Chandler, D., Anderson, C., Chizhikov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amplification+of+Cell+Culture+Enrichment+for+Improving+the+Sensitivity+of+Mycoplasma+Detection+Methods+Based+on+Nucleic+Acid+Amplification+Technology+%28NAT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Amplification of Cell Culture Enrichment for Improving the Sensitivity of Mycoplasma Detection Methods Based on Nucleic Acid Amplification Technology (NAT).</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 77, 223-232 (2007).</li>
<li>Volokhov, D. V., Graham, L. J., Borson, K. A., Chizhikov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycoplasma+Testing+of+Cell+Substrates+and+Biologics%3A+Review+of+Alternative+Non-Microbiological+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Probes%22%5BJournal%5D)">Mycoplasma Testing of Cell Substrates and Biologics: Review of Alternative Non-Microbiological Techniques.</a> Molecular and Cellular Probes. , (2011).</li>
</ol>

הכותבים הם עובדי סיגמא אולדריץ שיצרה ריאגנטים וכלים המשמשים במאמר זה.

בגלל הרגישות הקיצונית של הערכה, כאשר היא מבוצעת כהלכה הערכה צריכה להניב תוצאות מדויקות המציין אם המדגם שלך יש זיהום mycoplasma. הערכה כבר מותאם לשימוש עם ה-DNA פולימראז תקי JumpStart. Taqs אחרים ניתן להשתמש בעת הכנת הדגימות אבל הלהקה הבקרה הפנימית על 481 נ&quot;ב צריכים להיות נוכחים כדי לציין רגישות ראויה של תקי חלופיים. זה אפשרי עבור הלהקות חיובי להציג צפיפויות שונות בהתאם לרמת הזיהום. אפשר לראות את העדרו של הלהקה הבקרה הפנימית על דגימות מזוהמות בכבדות. באמצעות טכניקה נכונה זהירות בעת הכנת הדגימות על מנת למנוע זיהום הם קריטיים עבור הנכונה. זיהוי בעת שימוש Mycoplasma Lookout ערכת ה-PCR לזיהוי.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> מצפור Mycoplasma PCR ערכת זיהוי </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> MP0035 </td><td> </td></tr><tr><td> JumpStart תקי פולימראז ה-DNA </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> D9307 </td><td> </td></tr><tr><td> דם GenElute הגנום דנ&quot;א ערכת </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> MP0030 </td><td> </td></tr><tr><td> הגברה צינורות Nunc </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> T0447 </td><td> </td></tr></tbody></table>

אופטימליים pcr מבוססי זיהוי של mycoplasma

Optimized PCR-based Detection of Mycoplasma

תחזוקה של זיהום ללא שורות תאים חיוני מחקר מבוססי תאים. בין החששות הגדולים ביותר הם זיהום זיהום mycoplasma. למרות mycoplasma בדרך כלל לא להרוג תאים נגועים, הם קשים לאיתור יכול לגרום למגוון של השפעות על תאים בתרבית, כולל חילוף החומרים משתנה, האט התפשטות סטיות כרומוזומליות. בקיצור, זיהום mycoplasma פשרות את הערך של שורות תאים אלה במתן נתונים מדויקים על המחקר במדעי החיים. מקורות זיהום mycoplasma במעבדה הם מאוד מאתגר לשלוט לחלוטין. כמו מינים מסוימים mycoplasma נמצאים על העור האנושי, הם יכולים להיות הציג באמצעות טכניקה aseptic עניים. בנוסף, הם יכולים לבוא תוספי מזון מזוהם כמו בסרום שור עוברית, והכי חשוב משאר תרביות תאים נגועים. לאחר mycoplasma מזהם תרבות, היא יכולה להתפשט במהירות לזהם באזורים אחרים במעבדה. ההקפדה על נהלי מעבדה טובים כמו טכניקה aseptic טובים מפתח, בדיקה שגרתית עבור mycoplasma מומלץ מאוד לשליטה מוצלחת של זיהום mycoplasma. PCR מבוססי זיהוי של mycoplasma הפכה שיטה פופולרית מאוד לצורך תחזוקה שגרתית בתא קו. PCR מבוססות שיטות הזיהוי רגישים מאוד והוא יכול לספק תוצאות מהירות, המאפשר לחוקרים כדי להגיב במהירות כדי לבודד ולמנוע זיהום לאחר שהוא זוהה לעומת הזמן הנדרש באמצעות טכניקות מיקרוביולוגיות. Mycoplasma Lookout ערכת ה-PCR לזיהוי רגיש ביותר, עם הגבלה זיהוי של רק 2 הגנום לכל μl. ניצול של פולימראז מאוד ספציפיות תקי DNA JumpStart ועיצוב פריימר קניינית, חיוביות שגויות מופחתים מאוד. הפורמט נוח 8-צינור, רצועות מראש מצופה dNTPs, הקשורים primers עוזר להגדיל את התפוקה כדי לענות על הצרכים של הלקוחות עם אוספים גדולים של שורות תאים. לאור רגישות קיצונית של הערכה, בזהירות רבה יש לנקוט על מנת למנוע זיהום מכוונת של דגימות ריאגנטים. פרוטוקול צעד אחר צעד אנחנו מדגימים מדגיש את אמצעי הזהירות והנהלים הנדרשים לאיתור mycoplasma אמין. אנחנו גם מראים ולדון בתוצאות טיפוסי הפרשנות שלהם. המטרה שלנו היא להבטיח את הצלחת החוקרים באמצעות Mycoplasma Lookout ערכת ה-PCR לזיהוי.

Mycoplasma Lookout ערכת ה-PCR לזיהוי מנצל את שרשרת התגובה פולימראז (PCR), אשר הוקמה כשיטת הבחירה של רגישות גבוהה לגילוי של זיהום Mycoplasma, Acholeplasma ו Ureaplasma בתרביות תאים והתרבות תאים אחרים הנגזרים ביולוגיות.

אופטימליים PCR מבוססי זיהוי של Mycoplasma

שמירה על שורות תאים נקיות מזיהומים היא חיונית למחקר מבוסס תאים. אחת הדאגות המרכזיות בנוגע למזהמים היא זיהום במיקופלסמה (mycoplasma). ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים באופן חזותי את השלבים לשימוש בערכה לגילוי mycoplasma באמצעות PCR, המותאמת לזיהוי זיהום ב-mycoplasma. דבר זה מושג תחילה על ידי חימום הדגימות ל-95 °C כדי להשבית כל מולקולות DNA שעלולות להפוך את התבנית הרצויה לבלתי מתאימה ל-PCR. לאחר מכן, הכין את הדגימות ל-PCR באמצעות המבחנות המסופקות, המקודדות מראש עם נוקלאוטידים, פריימרים ו-DNA של בקרה פנימית.השלב השלישי של הפרוצדורה הוא מחזורי הטמפרטורה בתנאים שעברו אופטימיזציה קפדנית כדי להשיג את הרגישות הגבוהה ביותר ולמנוע הגברה לא ספציפית. בסופו של דבר, ניתן להוציא תוצאות כדי לקבוע אם הדגימות המדוברות מזוהמות ב-mycoplasma באמצעות הערכה על ידי אגרו-אלקטרופורזה של ג'ל. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות הוא שהריאגנטים מוכנים מראש ונעשה שימוש במבחנות PCR באיכות גבוהה.דבר זה הופך את התהליך לנוח ויעיל יותר. יתרון נוסף של ערכה זו הוא שהיא דורשת פחות משני גנומים של mycoplasma למיקרוליטר של דגימה כדי לזהות זיהום. בעת ביצוע ההליך לזיהוי mycoplasma, חשוב להימנע מכל זיהום אפשרי, להשתמש בציוד מגן אישי מתאים כדי לצמצם למינימום את החשיפה של העור, לוודא שכל הרכיבים שבהם נעשה שימוש נקיים מזיהום, ולהקפיד על טכניקה אספטית נאותה בכל עת.ניתן לבצע את הפרוצדורה ישירות על תעלילים של תרביות תאים, או להכין דגימות לשימוש במועד מאוחר יותר. כדי להכין דגימות לשימוש מאוחר יותר, העבירו 100 µL מכל תעליל למבחנת הגברה סטרילית והדגירו בטמפרטורה של 95 °C למשך חמש דקות. לאחר ההדגרה, ניתן לשמור את הדגימות בטמפרטורה של 2 עד 8 °C למשך עד שבוע.ממש לפני בדיקת הדגימות, בצעו סבב צנטריפוגה קצר כדי לשקיע שאריות תאיות. להכנת הדגימות עבור PCR, קבעו תחילה את הנפח הכולל של תמיסת ההמסה (rehydration buffer) של DNA polymerase הדרוש לתגובות. יש להוסיף יחידה אחת של DNA polymerase לכל תגובה לנפח המתאים של תמיסת ההמסה, אשר ישתנה בהתאם ל-tac שנעשה בו שימוש בהדגמה זו; jumpstart TAC D 93 0 7 ישמש בחמש תגובות: שלוש דגימות, בתוספת ביקורת חיובית אחת וביקורת שלילית אחת.העבר את הנפח המחושב של ה-DNA polymerase למבחנה נקייה למיקרו-צנטריפוגה, ולאחר מכן הוסף את הנפח המחושב של תמיסת ההרטבה (rehydration buffer). ערבב בעדינות את ה-DNA polymerase ותמיסת ההרטבה על ידי נקישה קלה על המבחנה. אין להשתמש במיקסר (vortex) עבור תערובת זו.השתמשו בנבובות התגובה השקופות המסופקות בערכה כדי להכין את הביקורת השלילית ואת הדגימות. נבובות תגובה אלו מכילות כבר את הנוקלאוטידים, הפריימרים ו-DNA של ביקורת פנימית; פקטו 23 µL של תמיסת רהידרציה ל-DNA polymerase שהוכנה מראש. ערבבו כל אחת מנבובות הביקורת השלילית והדגימות.לאחר מכן, הוסיפו 2 µL של מים נקיים מ-DNA לבקרת השלילה ו-2 µL מכל דגימה למבחנות הדגימה המתאימות. ערבבו את התכנים על ידי נקישה על המבחנות. אין להשתמש במיקסר (vortex) לערבוב התכנים.להכנת הבקרה החיובית, השתמשו במבחנות התגובה הוורודות המצורפות לערכה. מבחנות תגובה אלו מכילות כבר את הנוקלאוטידים, הפריימרים וה-DNA של הבקרה הפנימית; יש להוסיף למבחנת התגובה 25 microliters של תמיסת רהידרציה עבור DNA polymerase. ערבבו את התוכן באמצעות נקישה קלה על המבחנה; אין להשתמש ב-vortex.לאחר מכן, דגרו את מבחנות הביקורת החיובית, הביקורת השלילית והדגימה בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות. לאחר חמש דקות, העבירו את כל מבחנות התגובה לטרמיקלר (thermal cycler). עבור ה-PCR, הגדירו את התנאים הבאים ל-40 מחזורים.94 °C למשך 30 שניות. 55 °C למשך 30 שניות ו-72 °C למשך 40 שניות. שלב הפעלה אינו נדרש כאשר משתמשים ב-Jumpstart tack.עם השלמת מחזורי ה-PCR, הוציאו את הדגימות מהמעגל התרמי (thermal cycler) והניחו אותן על קרח לקירור לטמפרטורה של ארבע עד שמונה מעלות Celsius. כעת ניתן להעמיס את הדגימות על ג'ל אגרוז לאלקטרופורזה; העמיסו ישירות 8 µL מכל תגובת PCR לנתיב נפרד. אין צורך להוסיף תמיסת טעינה (loading buffer) וצבע לפני העמסת הדגימות, כיוון שהם כלולים בשפורי התגובה.עצרו את האלקטרופורזה לאחר שצבע המעקב נדדה 2.5 עד שלושה סנטימטרים. תוצאות מייצגות של זיהוי mycoplasma באמצעות PCR מוצגות בתמונה זו של נתיב בג'ל אגרוז. נתיב מספר שתיים הוא הבקרה השלילית, שבה אמור להופיע פס באורך של כ-481 base pairs.היעדרו של פס השלילה ב-481 זוג בסיסים מהווה אינדיקציה טובה לכך ש-TAC שנעשה בו שימוש לא היה רגיש מספיק. דגימות חיוביות ל-Mycoplasma יראו פסים בטווח של 270 פלוס או מינוס שמונה זוג בסיסים, כפי שמוצג בנתיבים שלושה עד שישה. הפס יהיה עבה בדגימות מזוהמות מאוד ודהה בדגימות מזוהמות קל.כל הדגימות מכילות בקרת שלילה פנימית כדי להוכיח כי ה-PCR התרחש כמצופה. היעדר הבקרה הפנימית בדגימות מזוהמות מאוד הוא תופעה נורמלית. היעדר פס הן בטווח החיובי והן בטווח השלילי, כפי שמוצג במסלול שבעה, מהווה אינדיקציה טובה לכך שהדגימות מעוכבות.במידה והדגימה מעוכבת, ניתן להסיר מעכבי PCR על ידי ביצוע מיצוי DNA. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של אופן ביצוע כל השלבים הדרושים המתוארים בנוהל הערכה, כמו גם כיצד לפרש את התוצאות ולבצע פתרון בעיות בעת הצורך.

optimized-pcr-based-detection-of-mycoplasma

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

העיצוב של התוכנית של יום אחד פשוט העבודה עבור אבחון פתוגן חיידקי מאפשרת זיהוי מהיר של זיהומים בדם. הכללת שמונה מטרות חיידקים רלוונטיות קלינית ופרופילים אנטיביוטיות ההתנגדות שלהם מציע תובנה המטפל הראשוני באותו יום, מה שעלול להוביל טיפול הולם יותר.

יום אחד זרימת עבודה עבור תוכנית זיהוי פתוגן חיידקי ובדיקות ההתנגדות Antimicrobial מתרבויות דם

אנו מתארים שיטה זמנית לצורך זיהוי של מיקרואורגניזמים בתוך מדגם באמצעות חרוזי ניאון oligonucleotide מצמידים. Amplicon מכל האורגניזמים בתוך מדגם הוא הכלאה בפני פאנל של בדיקה, בשילוב חרוזים. מכשיר Luminex או Bio-Plex משמש עבור כל שאילתת חרוז חרוז סוג האות הכלאה.

Multiplex זיהוי של חיידקים דוגמאות מורכבות קלינית הסביבה באמצעות oligonucleotide מצמידים פלורסנט microspheres

Assay qPCR פותח לצורך זיהוי של O157 החיידקים Escherichia: H7 מיקוד סמן גנטי ייחודי, Z3276. QPCR היה בשילוב עם טיפול monoazide propidium (PMA) לגילוי תא חי. פרוטוקול זה כבר שונה ומותאם לפורמט צלחת 96 היטב לטיפול קל ועקבי של דגימות רבות...

איתור של שידור חי<em&gt; חיידקי Escherichia</em&gt; O157: H7 תאים על ידי PMA-qPCR

בדיקות תפוקה גבוהה של פתוגנים מבוססים DNA ו- RNA על ידי ננו PCR מתוארות באמצעות כלבים syndromic ולוח PCR נשימת סוסים.

איתור תפוקה גבוהה של פתוגנים הנשימה בדגימות בעלי חיים על ידי ננו PCR

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכמת במדויק מספר שינויים גנטיים של אזור היעד בתגובה יחיד באמצעות מסירה ddPCR וזוג הידרוליזה הגששים ייחודי.

Droplet יחיד שרשרת התגובה פולימראז דיגיטלי עבור זיהוי מקיף, בו זמנית של מוטציות באזורים חמה

פיתחנו שיטה לזיהוי zoospores capsici Phytophthora במקורות מים באמצעות שיטת הפקת DNA נייר מסנן יחד עם לולאה בתיווך isothermal תוגבר (LAMP) essay שניתן לנתח בתחום או במעבדה.

זיהוי של Phytophthora capsici במים השקיה באמצעות לולאה בתיווך איזותרמית

בזיהום Mycoplasma pneumoniae, בדיקות סרולוגיות יכולות להניב תוצאות טובות, אך עם ספציפיות נמוכה בגלל תגובה צולבת אימונולוגית. ה- ELISA ללכידת אנטיגן פנימית, המתוארת במאמר זה, מבטיחה ספציפיות גבוהה של מינים והוכחה כבדיקת סינון אמינה לאבחון מדויק של M. pneumoniae.

בדיקת חיסון הקשורה לאנזים לכידת אנטיגן לזיהוי ספציפי של דלקת ריאות מיקופלסמה

פתוגנים חיידקיים שונים עלולים לגרום לזיהומים בדרכי הנשימה ולהוביל לבעיות בריאותיות חמורות אם לא מזהים אותם במדויק ומטפלים בהם מיד. זיהוי מהיר ומדויק של פתוגנים אלה באמצעות הגברה איזותרמית בתיווך לולאה מספק ניהול ובקרה יעילים של זיהומים בדרכי הנשימה בסביבות קליניות.

זיהוי מהיר של פתוגנים חיידקיים הגורמים לזיהומים בדרכי הנשימה התחתונות באמצעות הגברה איזותרמית בתיווך לולאה בתיווך שבב מיקרופלואידי

וידאו זה מדגים את פרוטוקול ב assay אנגיוגנזה במבחנה כי משחזר שלבים שונים של אנגיוגנזה. זמן לשגות תמונות של הנבטה, היווצרות לומן, הסתעפות ו השקה - התכונות העיקריות של אנגיוגנזה - מוצגים.

אופטימליים הפיברין ג&#39;ל ביד Assay לחקר אנגיוגנזה

Ubiquitination הוא שינוי posttranslational המפתח בוצע על ידי קבוצה של שלושה אנזימים. מוטציות של גנים המעורבים שינוי זה קשור הרבה מחלות אנושיות שונות. כאן אנו מתארים פרוטוקולים לזהות ubiquitination החלבון בתאים...

זיהוי של חלבון Ubiquitination

למדו לזהות זיהום מיקופלזמה בתרביות תאים באמצעות ערכת PCR ייעודית. השיטה כוללת הכנת דגימות, מחזורי טמפרטורה ואלקטרופורזה על ג'ל אגרוז לקבלת תוצאות אמינות במהירות.

אופטימליים PCR מבוססי זיהוי של Mycoplasma

גלה סרטונים נוספים