בידוד מגנטי של תאי מיקרוגליה ממוחות של גורי עכברים

מיקרוגליה - המקרופאגים השוכנים במוח - מבטאים CD11b, אינטגרין על פני התא.

כדי לבודד מיקרוגליה ממוחות גורי עכברים, קח שברי מוח בצינורות דיסוציאציה המכילים חיץ עם פפאין, אנזים פרוטאוליטי ודאוקסיריבונוקלאז.

הניחו את הצינורות על מפריד מכני. במהלך הריצה, המפריד משבש מכנית את הרקמה.

פפאין מעכל את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה, ומשחרר תאים, כולל מיקרוגליה, לתרחיף. דאוקסיריבונוקלאז משפיל DNA חופשי בתרחיף, ומונע בידוד תאים לא יעיל.

צנטריפוגה. השלם את הניתוק המכני על ידי פיפטינג. העבירו את התרחיף דרך מסננת תאים כדי להסיר פסולת וגושי תאים, ולקבל אוכלוסייה הומוגנית של תאים בודדים.

דגירה עם מיקרו-חרוזים סופר-פרמגנטיים המתפקדים עם נוגדנים נגד CD11b. המיקרו-חרוזים נקשרים באופן ספציפי ל-CD11b בתאים, כולל מיקרוגליה.

לאחר הדגירה, צנטריפוגה. הסר את הסופרנטנט המכיל חרוזים לא כרוכים. השעו מחדש את התאים במאגר. טען על עמוד המונח על מפריד מגנטי. העמוד מורכב ממטריצה עם חרוזים פרומגנטיים.

כאשר הם מונחים על המפריד, הכדורים בתוך העמודה מגבירים את השדה המגנטי, ושומרים על תאי CD11b+ הקשורים למיקרו-חרוזים בתוך העמודה, בעוד שתאים אחרים זורמים דרכו.

הסר מהמפריד והשתמש במאגר כדי להוציא את תאי CD11b+ מהעמודה. צנטריפוגה את התרחיף והשעיה מחדש של תאי CD11b+ בתווך מיקרוגליה.

התאים המבודדים מוכנים לניתוח נוסף.

הכן תערובת דיס