ניטור דינמיקת גיוס נויטרופילים ועומס חיידקים באתר ההדבקה במודל מורין

כדי לעקוב אחר גיוס הנויטרופילים - תאים חיסוניים חיוניים המאפשרים פינוי חיידקים, התחל עם עכבר מורדם, טרנסגני ומדוכא חיסון עם פצע החושף את רקמת החיבור על גבו.

הנויטרופילים של העכבר הטרנסגני מבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר, המאפשר מעקב אחר נויטרופילים. בנוסף, יכולת הרג החיידקים הלקויה שלהם הופכת את העכבר לרגיש יותר לזיהום.

קחו חיסון חיידקי מהונדס גנטית בעל ביולומינסנציה - מאפיינים פולטי אור.

הזריק את החיסון החיידקי במקום הפצוע, והבטיח את העברתו בין רקמת החיבור לפאשיה - שכבת רקמה סיבית מתחת לרקמת החיבור. באתר ההזרקה, החיידקים מתרבים ומתיישבים וגורמים לזיהום ברקמות.

בתגובה לזיהום, תאי החיסון משחררים כימוקינים - מולקולות איתות כימיות המושכות את הנויטרופילים. הנויטרופילים נודדים במהירות באמצעות כימוטקסיס - תנועה הנגרמת על ידי כימיקלים, ומתפשטים דרך כלי הדם לרקמה בקרבת הזיהום החיידקי.

דמיין את העכבר עבור אותות ביולומינסנציה ופלואורסצנטיים, המייצגים את עומס החיידקים ואת הנויטרופילים המגויסים, בהתאמה.

עם הזמן, עלייה באותות הביולומינסנציה והפלואורסצנציה נמצאת בקורלציה עם העומס החיידקי המוגבר וגיוס הנויטרופילים המתמשך באתר הזיהום.

לחיסון Staph aureus, מלאו מזרק אינסולין בגודל 28 ב-50 מיקרוליטר של החיסון החיידקי הביו-לומינסנט המוכן, והשתמשו באצבע כדי למשוך את הדרמיס של החיה הפצועה הצידה. החזיקו את המזרק כמעט במקביל לרקמה, הכניסו לאט את המזרק לרקמה עד שמורגשת ירידה פתאומית בהתנגדות, מה שמעיד על פירסינג של הפאשיה.

כשהמחט מונחת במרכז הפצע, העבירו לאט לאט את כל נפח החיסון. ודא שהחיסון יוצר בועה במרכז הפצע עם דליפה או פיזור מינימלי, והסר את המזרק באיטיות מבעל החיים. לאחר מכן, החזירו את החיה לכלוב שלה עם חום ומעקב, עד להחלמה מלאה.

לאחר פציעה וזיהום, ומדי יום במהלך הניסוי, הניחו את העכבר המורדם בהדמיה ביולוגית ופלואורסצנטית כשהפצע שטוח ככל האפשר. בתוכנת הצילום, בחר זוהר וצילום כמצבי ההדמיה. יש להגדיר מראש את זמן החשיפה לדקה אחת בשילוב קטן, F/stop 1 עבור זוהר, F/stop 8 עבור צילום ופתוח עבור מסנן הפליטה. לאחר מכן, לחץ על רכוש כדי להקליט את התמונה.

עבור הדמיה פלואורסצנטית in vivo, בחר פלואורסצנטי וצילום כמצבי ההדמיה. יש להגדיר מראש את זמן החשיפה לשנייה אחת בשילוב קטן, F/stop 1 עבור פלואורסצנטי, F/stop 8 עבור צילום, ואורכי גל עירור ופליטה של 465 מעל 30 ננומטר ו-520 מעל 20 ננומטר עם עוצמת מנורה גבוהה בהתאמה. לאחר מכן, לחץ על רכוש כדי להקליט את התמונה.

לאחר השגת שתי קבוצות התמונות, החזר את החיה לכלוב שלה עם ניטור עד להחלמה מלאה.

לניתוח תמונה, פתח את התמונה לכימות בתוכנת ניתוח תמונה מתאימה, והנח את אזור העניין המעגלי המוגדר כברירת מחדל על כל אזור הפצע, כולל העור שמסביב. לחץ על מדוד אזור עניין, ורשום את הערכים עבור השטף הממוצע עבור הפצע כדי לאפשר להתוות את השטף הממוצע של כל אות לעומת הזמן.

כדי למדוד את ריפוי הפצע, התאימו אזור עניין מעגלי מעל קצה הפצע ומדדו את שטח הפצע בסנטימטרים בריבוע כדי לאפשר שרטוט של השינוי השברירי מקו הבסיס לעומת הזמן.