הפעלת מקרופאגים שמקורם במח עצם עכבר בתגובה לנוגדנים

בעקבות חשיפה לפתוגן, מקרופאגים עוברים הפעלה ומשחררים ציטוקינים פרו-דלקתיים ואנטי דלקתיים, המתאמים את תגובת מערכת החיסון.

כדי לחקור את הפעלת המקרופאגים שמקורם במח עצם במבחנה, העבירו תרחיף תאי מח עצם מבודד של עכבר לבקבוק תרבית. דגירה קצרה.

התאים המזנכימליים, המונוציטים והמקרופאגים הבוגרים נצמדים למשטח הבקבוק בעוד האבות ההמטופויאטיים נשארים בתרחיף.

אסוף את המדיה המכילה אבות המטופויאטיים וצנטריפוגה. העבר את התאים התלויים מחדש בגורם מגרה מושבת מקרופאגים, M-CSF, מדיה לבקבוק תרבית.

M-CSF גורם לתת-אוכלוסיית האב המיאלואיד להתמיין למקרופאגים, שנראים מסועפים ונצמדים לבקבוק.

השליכו את המדיה שאינה מכילה תאים שאינה נדבקת. הוסף מדיית M-CSF ודגירה. ברגע שהמקרופאגים מגיעים למצב התפקודי המלא שלהם, קצרו אותם. צנטריפוגה.

מקרופאגים של לוחות מושעים במדיה M-CSF לבארות צלחות מרובות בארות. לאחר היצמדות מקרופאגים לבארות, הוסף אימונוגלובולינים פוליקלונליים אנושיים וליפופוליסכריד חיידקי, LPS, רעלן.

אימונוגלובולינים נקשרים לקולטני FCγ ספציפיים, בעוד LPS נקשר לקולטנים דמויי טול על מקרופאגים. גירוי משותף זה מניע הפעלת מקרופאגים אנטי דלקתיים באמצעות מפלי איתות במורד הזרם, וגורם לשחרור רמות גבוהות של ציטוקינים אנטי דלקתיים ורמות נמוכות של ציטוקינים פרו-דלקתיים.

אסוף את המדיה המכילה ציטוקינים לניתוח נוסף כדי לאשר א