JoVE Encyclopedia of Experiments
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:41 דק' • July 8th, 2025
הפעלת תאי B כרוכה בזיהוי אנטיגנים על ידי קולטני תאי B, BCRs, על פני השטח שלהם כדי לעורר תגובה חיסונית.
כדי לחקור את הפעלת תאי B במבחנה, התחל עם כיסוי המכיל אנטיגנים ונוגדנים נגד CD45R, משותק על חומר פולימרי. האנטיגנים והנוגדנים הטעונים שלילית מקיימים אינטראקציה עם פולימרים טעונים חיובית על הכיסוי באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות.
מכסים את הכיסויים המצופים במדיום המכיל תאי B ודוגרים. ה-CD45R - החלבון הטרנסממברני של תאי B - מקיים אינטראקציה עם הנוגדנים המשותקים, ומקל על הידבקות התאים.
ה-BCRs על תא B המודבק מקיימים אינטראקציה עם אנטיגן, ויוצרים סינפסה חיסונית - אזור התיאום לאיתות תאים והפנמת אנטיגן. זה מקדם עיצוב מחדש של שלד התא ויוזם התפשטות תאים, מה שמגדיל את פני התא במגע עם האנטיגנים.
שיפוץ נוסף גורם לתנועה של אנטיגנים המחוברים ל-BCR לעבר מרכז הסינפסה החיסונית. סידור מחדש תאי זה גורם למיקום מחדש של הצנטרוזום ליד הממברנה הסינפטית המנחה אברונים תוך-תאיים, כולל ליזוזומים, לעבר הסינפסה.
היתוך הליזוזומים עם הממברנה מוביל להפנמת מתחמי האנטיגן-BCR. האנטיגנים המופנמים מעובדים לשברי פפטיד, נטענים על קומפלקס תאימות היסטולוגית עיקרי מסוג II או מולקולות MHC, ולבסוף מוצגים על תאי B פעילים.
הכן את תמיסת האנטיגן על ידי הוספת אנטי-BCR ו-B220 ב-PBS לריכוז סופי של 10 מיקרוגרם למ"ל ו-7.5 מיקרוגרם למ"ל בהתאמה. לאחר מכן, הניחו את הכיסוי על מכסה של צלחת 24 בארות מכוסה בניילון פרפין, והוסיפו 40 מיקרוליטר תמיסת אנטיגן. אוטמים את הצלחת ואז דוגרים בארבע מעלות למשך הלילה.
כדי להתחיל את ההפעלה ב-coverslip, ראשית, שטפו אותם עם PBS ותנו להם להתייבש מספר דקות. לאחר מכן, הוסיפו 150,000 תאי B, ודגרו ב-37 מעלות עבור נקודות הזמן השונות. בשני המקרים, כאשר מפעילים עם חרוזים או שקופיות מצופות אנטיגן, אנו ממליצים להתחיל בנקודת הזמן הארוכה ביותר, ולאחר מכן להמשיך לקצרות יותר.
מאמר זה מדגים פרוטוקול in vitro לחקר דינמיקה של אברונים בתאי B במהלך היווצרות סינפסה חיסונית. השיטה מתמקדת ברצף האירועים following זיהוי אנטיגן על ידי קולטני תאי B (BCRs), כולל עיצוב מחדש של השלד התאי, היווצרות סינפסה חיסונית, תנועת ליזוזומים, הפנמה של אנטיגן והצגת אנטיגן על מולקולות MHC class II.
הפעלה של תאי B במערכת in vitro על עלויות מצופות באנטיגן מאפשרת ניתוח מדויק של התהליכים המעמדים את יצירת הסינפסה החיסונית ודינמיקת האברונים, ובכך תומכת בגילויים בשלבים מוקדמים של חקר האימונולוגיה. מערכת זו מספקת בהירות מכניסטית לתהליכי עיבוד והצגה של אנטיגנים, מה שמסייע בתיקוף מטרות והפחתת סיכונים בפיתוח אימונותרפיה. גישה זו מגבירה את הביטחון בניבוי תוצאות עבור סריקות המשך ומחקרים תרגומיים בתחום החסינות הנרכשת.
שיטה זו משתלבת ברצף הגילוי, החל ממחקרים מכניסטיים מוקדמים ועד למחקרי אימונולוגיה פרה-קליניים, ותומכת הן בתיקוף מטרות והן בהכנה של מערכי בדיקה.
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
עודכן לאחרונה: 29 אוגוסט 2026