טכניקה ליצירת מודל מורין של קוליטיס הנגרמת על ידי דקסטרן סולפט נתרן

כדי לגרום לקוליטיס - מחלת מעי דלקתית - במודל של עכברים, קחו עכבר השוכן בכלוב.

החלף את מי השתייה בתמיסה של נתרן דקסטרן סולפט, DSS, פוליסכריד הגורם לקוליטיס. אפשר לעכבר לצרוך את התמיסה להתפתחות קוליטיס.

עם הצריכה, DSS נכנס ללומן של המעי הגס של העכבר. המעי הגס מכיל שכבת ריר עבה, המספקת מחסום פיזי בין החיידקים הקומנסליים לבין חד-שכבת תאי האפיתל הבסיסית.

DSS חודר לשכבת הריר ונכנס לתאי האפיתל. בתוך התאים, DSS משנה את הביטוי של חלבוני צומת הדוק וגורם לאפופטוזיס, וכתוצאה מכך לשיבוש שכבת האפיתל והמחסום הרירי. זה מאפשר כניסה של חיידקים לומינליים לתוך הלמינה פרופריה - הרקמה הבסיסית עם תאים דנדריטיים ומקרופאגים.

תאי החיסון מזהים את החיידקים, ומפעילים איתות במורד הזרם כדי להפריש ציטוקינים מעודדי דלקת. ציטוקינים גורמים לחדירה של מספר רב של תאי T המפעילים תגובה חיסונית מוגזמת, וכתוצאה מכך דלקת.

עקוב אחר העכבר המטופל לאיתור הפרעות במערכת העיכול וירידה במשקל, המעיד על הופעת קוליטיס.

המתת חסד של העכבר; בידוד כירורגי של כל המעי הגס. חלקו את המעי הגס לחלקים פרוקסימליים, אמצעיים ודיסטליים והוסיפו קיבוע לשימור רקמות.

הרקמה מוכנה לבדיקות במורד הזרם כדי להעריך קוליטיס.

כדי לגרום לנתרן דקסטרן סולפט, או קוליטיס DSS, החלף את מי השתייה הרגילים בתמיסת DSS 3% אד ליביטום למשך שבעה ימים, תוך מדידת משקל הגוף של כל עכבר, צריכת תמיסת DSS וייצור הצואה מדי יום. בתום הטיפול בן שבעת הימים, הניחו את העכבר במצב שכיבה, והשתמשו במספריים קטנים כדי לבצע חתך בקו האמצע באורך שלושה סנטימטרים בבטן.

לאחר מכן, השתמשו במלקחיים כדי להרים את המעי הגס כדי לאפשר להפריד אותו מהמזנטריה שמסביב, וחלצו את כל המעי הגס עד שהצקום והחלחולת נראים לעין. לחצות את הרקמה בשולי המעי הגס ועמוק בתוך האגן, כדי לשחרר את המעי הגס הפרוקסימלי והדיסטלי בהתאמה.

מדדו ורשמו את אורך המעי הגס המבודד, והשתמשו במזרק של 10 מיליליטר המצויד במחט גבאז' כדי לשטוף את המעי הגס ב-10 מיליליטר PBS קר כקרח כדי להסיר את הצואה והדם עד שהפליטה תתבהר. לזיהוי היסטולוגי, חלקו את דגימות הרקמה לחלקים פרוקסימליים, אמצעיים ודיסטליים בגודל שווה, וקבעו את הרקמות ב-4% פרפורמלדהיד למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס.