השפעת נוגדן Anti C-fms על אוסטאוקלסטוגנזה בתאי מח עצם עכבר במבחנה

אוסטאוקלסטוגנזה הוא התהליך שבו מבשרי אוסטאוקלסטים מתמיינים ומתמזגים ליצירת אוסטאוקלסטים מרובי גרעינים.

כדי לחקור את ההשפעה של נוגדן anti-c-fms על אוסטאוקלסטוגנזה במבחנה, קח צלחת תרבית המכילה תרחיף תאי מח עצם של עכבר. הוסף גורם מגרה מושבת מקרופאגים, M-CSF.

בתרבית, M-CSF נקשר לקולטן הספציפי שלו, c-fms, על תאי מבשר מיאלואידים, מפעיל מסלולי איתות וגורם להתמיינות למקרופאגים של מח העצם, BMMs, המייצגים מבשרי אוסטאוקלסטים ונצמדים לצלחת.

הסר את התאים שאינם נדבקים. קצרו את ה-BMMs, וזרעו אותם על בארות צלחות מרובות בארות. תוסף עם M-CSF ומפעיל קולטן של ליגנד הגורם הגרעיני kappa-Β, RANKL.

הוסף ריכוזי נוגדנים הולכים וגדלים נגד c-fms לבארות.

בבאר הבקרה, M-CSF נקשר לקולטני c-fms ומפעיל מסלולי איתות, ממריץ את ביטוי קולטני RANK ומקדם הישרדות והתפשטות של BMM. RANKL נקשר לקולטני RANK, מפעיל מפל איתות וגורם להתמיינות BMM ואיחוי לאוסטאוקלסטים.

בבארות עם ריכוזי נוגדנים גבוהים יותר, הנוגדנים נקשרים וחוסמים ביעילות את קולטני c-fms ומשבשים את האיתות הנדרש להתמיינות אוסטאוקלסטים, ובכך מעכבים היווצרות אוסטאוקלסטים.

בצע צביעה כדי לזהות ולכמת את אוכלוסיות האוסטיאוקלסטים ולקבוע את ריכוז הנוגדנים היעיל לעיכוב אוסטאוקלסטוגנזה בהיווצרות אוסטאוקלסט המושרה על ידי RANKL.

זרעו 10 מיליון תאים ל-10 מיליליטר בצלחת תרבית של