ננו-הזרקה נגיפית תוך-חזה לחקר אינטראקציות בין וירוס מארח בזבובים בוגרים

קח דרוזופילה זכר מורדם מסוג בר ומוטציה Dicer-2 על צלחת הזרקה תחת סטריאומיקרוסקופ. ודא שהזבובים נקיים מכל חיידקים סימביוטיים המדכאים את שכפול נגיף ה-RNA.

חסנו את הזבובים תוך בית החזה עם מזרק ננו המכיל תרחיף נגיף RNA חד-גדילי בעל חוש חיובי.

הנגיף נכנס לתא המארח באמצעות אנדוציטוזיס בתיווך קולטנים ומשכפל את עצמו ומייצר RNA ביניים דו-גדילי. קולטן זיהוי דפוס המארח Dicer-2 מעבד את ה-RNA הדו-גדילי הנגיפי ל-RNA מפריע קטן, siRNAs.

ה-siRNA נקשר לקומפלקס ההשתקה המושרה על ידי RNA, RISC, שם מסירים את הגדיל המשלים שלו. ה-siRNAs הטעונים ב-RISC נקשרים ל-RNA נגיפיים אחרים באמצעות זיווג בסיסים משלים, מה שגורם לפירוק RNA ויראלי ולהשתקת גנים.

אינטראקציה של Dicer-2 ו-RNA ויראלי מפעילה מפלי איתות אנטי-ויראלים במורד הזרם, ומייצרת חלבונים אנטי-ויראליים. חלבונים אנטי-ויראלים אלה מקיימים אינטראקציה עם קולטני ציטוקינים הקשורים לחלבון של תאי מארח שכנים, או JAK, ויוזמים דימריזציה של קולטן וזרחון JAK.

JAKs מופעלים זרחנים ומפעילים חלבוני STAT, מתמר אותות ומפעיל שעתוק. STATs מופעלים עוברים לגרעין ונקשרים לרצפי DNA ספציפיים, ומתחילים שעתוק של גנים לתגובה אנטי-ויראלית.

גדל את הזבובים לתקופה רצויה.

ניתוח במורד הזרם מצביע על ירידה בשיעור ההישרדות ועומס נגיפי מוגבר בזבובים מוטנטיים של Dicer-2.

לזיהום ויראלי, ראשית, השת