ניתוח ההשפעה של תכשירי טבק על ייצור ציטוקינים באמצעות צביעה תוך-תאית וציטומטריית זרימה

באינטראקציה עם ממריצים דלקתיים, תאי החיסון משחררים מולקולות איתות דלקתיות - ציטוקינים - כדי לייצר תגובה חיסונית.

כדי לנתח את ההשפעה של תכשירי מוצרי טבק, TPPs, קח צלחת מרובת בארות עם ריכוזי TPP הולכים וגדלים. זרעו את הצלחת עם תאים חד-גרעיניים מדם היקפי אנושי, PBMCs המכילים תאים חיסוניים.

ניקוטין - חומר מדכא חיסון ב- TPPs - נקשר לקולטני אצטילכולין ניקוטיניים, ומפחית את ויסות ייצור הציטוקינים הפרו-דלקתיים. הורדת ויסות זו תלויה במינון, כאשר לריכוזים גבוהים יותר יש השפעה משמעותית יותר.

צנטריפוגה כדי לגלול את התאים ולהשליך את הסופרנטנט המכיל שאריות TPP.

השעו מחדש את התאים בתווך שלם והוסיפו תערובת המכילה ליפופוליסכריד - ממריץ חיסוני ו- GolgiPlug - מעכב הובלת חלבון.

מולקולות ליפופוליסכריד מקיימות אינטראקציה עם תאים חיסוניים המכילים קולטן דמוי טול-4, ומפעילות מסלולי איתות תוך-תאיים וייצור ציטוקינים פרו-דלקתיים. בינתיים, מולקולות GolgiPlug חוסמות את הפרשת הציטוקינים ממנגנון גולגי ומאפשרות את הצטברותו.

תקן את התאים בתמיסה מקבעת וחלחל אותם בעזרת חומר יוצר נקבוביות. כיסו את התאים בקוקטייל של נוגדנים אנטי-ציטוקינים מתויגים בפלואורופור, שנכנסים דרך הנקבוביות ונקשרים לציטוקינים תוך-תאיים בהתאמה.

נתח את התאים המוכתמים על ידי ציטומטריית זרימה, המודדת אותות פלואורסצנטיים.

קביעת רמת ייצור הציטוקינים;