טכניקת מבחנה לגירוי לימפוציטים באמצעות חיידקים פתוגניים

כדי לעורר לימפוציטים באמצעות המופילוס אינפלואנזה - חיידק פתוגני, קח תרחיף של תאים חד-גרעיניים מבודדים בדם היקפי, או PBMCs, כולל לימפוציטים ותאים מציגי אנטיגן או APCs.

הוסף תרחיף חיידקים ודגירה בטמפרטורה פיזיולוגית.

קולטנים לזיהוי דפוסים על ה-APCs נקשרים לרכיבים ספציפיים של תאי החיידקים, ומעוררים פגוציטוזיס. הפגוזום - המכיל חיידקים מופנמים - מתמזג עם הליזוזום, גורם לפירוק חיידקים ועיבוד לשברי פפטיד.

קומפלקס תאימות היסטולוגית עיקרי או מולקולות MHC נקשרות לשברי הפפטיד ומציגות אותם על פני התא כאנטיגנים. לימפוציטים מסוג T נקשרים לאנטיגן המוצג באמצעות קולטן תאי T.

הוסף נוגדנים לגירוי משותף הנקשרים לקולטני שטח ספציפיים על לימפוציטים מסוג T. הקישור הסינרגטי גורם לאיתות במורד הזרם, ומפעיל ייצור ציטוקינים לימפוציטים מסוג T.

הוסף תרכובת חוסמת גולגי - החוסמת את הובלת החלבון השלפוחית מהרטיקולום האנדופלזמי לגולגי - כדי לעכב הפרשת ציטוקינים מלימפוציטים מסוג T, מה שמקל על הצטברות ציטוקינים תוך תאיים.

הוסף מקבע לשימור מורפולוגיה תאית וחומר ניקוי כדי לחלחל את קרום התא. הוסף קוקטייל של נוגדנים עם תווית פלואורסצנטית, כולל נוגדנים הנקשרים לסמני פני השטח הספציפיים ללימפוציטים T - המסמנים את פני התא - ונוגדנים ספציפיים לציטוקינים החודרים לתוך התא כדי לקשור ציטוקינים תוך תאיים.

בצע ציטומטריית זרימה כדי לז