כימות מתווכי דלקת בתאים נגועים ברקמה אנושית

במהלך זיהום, לימפוציטים מופעלים משחררים מתווכים דלקתיים - ציטוקינים - כדי לעורר תגובה חיסונית.

כדי לכמת מתווכים דלקתיים ברקמה נגועה, התחל עם תרחיף תאים המכיל תאים חיסוניים שמקורם ברקמת ריאה אנושית.

דגרו על התאים עם המופילוס אינפלואנזה - חיידק פתוגני נשימתי. אנטיגנים פני השטח של החיידקים מקיימים אינטראקציה עם קולטנים לזיהוי דפוסים בתאי חיסון פגוציטים. זה יוזם הפנמת חיידקים, עיבוד לפפטידים קטנים יותר והצגת הפפטיד על ידי מולקולת קומפלקס התאימות ההיסטולוגית העיקרית.

מולקולת האנטיגן-MHC-II על תאים פגוציטים נקשרת ללימפוציטים מסוג T דרך קולטני תאי T, יחד עם אינטראקציות קולטני גירוי משותף, וכתוצאה מכך הפעלת לימפוציטים מסוג T וייצור ציטוקינים פרו-דלקתיים.

טפל בתאים עם חוסמי גולגי, הפוגעים בשחרור ציטוקינים - מה שגורם להצטברות שלהם בתוך התאים. שטפו את התאים עם מאגר חוסם כדי לחסום אתרי קשירה לא ספציפיים.

צבעו את תרחיף התא בתערובת של נוגדנים המסומנים בפלואורופור הנקשרים במיוחד לסמני פני השטח של לימפוציטים מסוג T אנושיים, ומאפשרים תיוג של לימפוציטים.

תקן את התאים וחדור אותם בעזרת חומר פעילי שטח היוצר נקבוביות. דגרו על התאים החדירים עם נוגדנים אנטי-ציטוקינים המסומנים בפלואורופור, הנכנסים לתאים ומקיימים אינטראקציה עם ציטוקינים ספציפיים.

באמצעות ציטומטריית זרימה, מדוד את אות הקרינה של הציטוקינים בת