קביעת ייצור ROS על ידי נויטרופילים באינטראקציה עם ביופילם אופסוני

חיידקים המתויגים באופסונינים מזוהים על ידי קולטני נויטרופילים ספציפיים, המעוררים פגוציטוזיס עם מיני חמצן תגובתיים, או ROS, שחרור ופירוק חיידקים.

כדי לכמת את ייצור ה- ROS על ידי נויטרופילים במבחנה, קח צלחת מרובת בארות. באר הבדיקה מכילה ביופילם Staphylococcus aureus המורכב מחיידקים משובצים בסרט מטריצה חוץ-תאי. באר הבקרה היא ללא הביופילם.

דגרו על הביופילם עם סרום אנושי, מה שמאפשר לאופסונינים בסרום להפוך את הביופילם לאופסוניזציה.

שאפו את הסרום. שוטפים עם חיץ, מסירים אופסונינים לא קשורים. הוסף נויטרופילים ולומינול - תרכובת כימילומינסנט לבארות. צנטריפוגה, המקרבת את הנויטרופילים לביופילם.

בעזרת קורא צלחות, מדוד את הזוהר לאורך זמן.

בבאר המכילה ביופילם, נויטרופילים נקשרים לאופסונינים של הביופילם, וגורמים להפעלת נויטרופילים ולהפנמת חיידקים לפאגוזומים. מסלולי איתות ספציפיים מופעלים, וגורמים להרכבת NADPH אוקסידאז על פגוזומים.

NADPH אוקסידאז מזרז העברת אלקטרונים מ-NADPH לחמצן מולקולרי, ומייצר ROS שמפרק חיידקים. יתר על כן, NADPH אוקסידאז על קרום התא משחרר ROS מחוץ לתא

.

בתגובה, חיידקי ביופילם מייצרים אנזימים המנטרלים ROS ומשחררים לויקוצידינים היוצרים נקבוביות בממברנות נויטרופילים וגורמים לליזה, המשבשים את ייצור ה-ROS. לומינול מגיב עם ROS, גורם לעירור שלו, ופולט זוהר עם הרפיה.

באר הבדיקה מציגה רמו