בדיקת מבחנה לחקר האינטראקציה בין נויטרופילים וביופילם

ביופילם הוא קהילה של חיידקים דבוקים לפני השטח המוטמעים בתוך מטריצה של חומרים פולימריים חוץ-תאיים, EPS, ממקור מיקרוביאלי.

כדי לחקור אינטראקציות בין תאים חיסוניים לביופילם במבחנה, קחו שקופית עם תעלה המכילה ביופילם של Staphylococcus aureus - פתוגן אופורטוניסטי. החיידקים המהונדסים מבטאים חלבון פלואורסצנטי לזיהוי מיקרוסקופי. התעלה מתחברת למאגרים מלאים במדיה כדי לספק חומרי הזנה לחיידקים.

הוסף תרחיף של נויטרופילים המסומן בצבע עוקב אחר תאים פלואורסצנטיים. המדיום מכיל גם אתידיום הומודימר, שמכתים את ה-DNA של התאים המתים. דגירה בתנאים פיזיולוגיים.

קולטני זיהוי הדפוסים על נויטרופילים נקשרים לדפוסים המולקולריים הקשורים לפתוגן על החיידקים. הקישור גורם לנויטרופילים לפגוציטוזה של החיידקים ולייצר מיני חמצן תגובתיים חוץ-תאיים או ROS, ולהרוג את החיידקים.

כדי להתחמק מהתגובה החיסונית, חיידקים משחררים אנזימים לניקוי רעלים שמפחיתים את רעלן ה-ROS והלוקוצידין שגורם למוות של תאים. לוקוצידין מונומרי נקשר לקולטנים ספציפיים על הנויטרופילים ועובר מולטימריזציה ליצירת נקבוביות, משבש את שלמות הממברנה והורג את התאים.

האתידיום הומודימר נכנס דרך קרום התא הפגוע, ומכתים את התאים המתים.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי בעל שדה רחב, תת-קבוצה של תאי חיידקים ונויטרופילים נראים מתים, מה שמעיד על אינטראקציה בין נויטרופילים לביופילם